丹酚酸B 通过下调细胞凋亡及炎性损伤减轻高糖诱导的RSC96 细胞损伤*

王倩倩，孙连庆

西安交通大学第一附属医院,陕西 西安710061

糖尿病周围神经病变是糖尿病患者出现神经功能障碍体征或症状的一类并发症，主要表现为感觉、运动功能障碍，严重影响患者的生活质量［1-4］。但目前有关糖尿病周围神经病变的发病机制尚未阐明，尚缺乏有效的治疗手段。丹酚酸B（salvianolic acid B，Sal B）是丹参的有效水溶性成分，具有抗氧化、清除自由基、抗凋亡、抗炎等作用［5-10］。本研究通过离体实验观察Sal B 对HG 培养的雪旺细胞增殖活性、凋亡及炎性因子表达的影响，探讨Sal B 是否通过抑制细胞凋亡及炎性损伤对糖尿病周围神经病变起到防治作用。

1 材料与方法

1.1 实验细胞大鼠雪旺细胞系细胞（rat schwann cell line，RSC96）是一种永生化的大鼠雪旺细胞，购自美国模式培养物集存库ATCC，由陕西藩胜生物科技有限公司上海办代为采买。

1.2 药品及试剂D-葡萄糖、Sal B、噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）（Sigma，美国）；低糖培养基、HG 培养基（Hyclone，美国），Annexin V-FITC（七海生物，中国）；活性氧（reactive oxygen species，ROS）测定试剂盒（南京建成生物工程研究所有限公司，中国）；兔抗大鼠Bax，Bcl-2，P65，抗体（CST，美国）；白细胞介素1β（Interleukin-1β，IL-1β）（Immunoway，中国）。

1.3 实验仪器CO2培养箱（上海普美达仪器有限公司，中国）；倒置相差显微镜（olympus，日本）；台式高速离心机（苏州华宇净化设备有限公司，中国）；酶标仪（BioTek，美国）；流式细胞仪（BD Biosciences公司，美国）。

1.4 实验方法

1.4.1 细胞培养及传代 复苏RSC96 细胞，加入DMEM培养基、胎牛血清（10%）、双抗，2～3天换液1次。待细胞长至瓶底80%～90%，用2.5 g/L 胰蛋白酶消化，3～5 天传代一次，取对数生长期细胞进行实验。

1.4.2 MTT 比色法检测OD 值 按照2000/孔的密度将RSC96细胞接种于96孔板，加入不同浓度HG培养……