脂多糖诱导的ATDC5细胞中MicroRNA表达△

李 建，江 攀，李大鹏，赵国阳

（江苏大学附属医院，江苏镇江212000）

骨关节炎（osteoarthritis,OA）是一种以关节炎症和关节软骨进行性退变为特征的常见慢性关节疾病，其主要表现为关节疼痛、僵硬、活动受限，严重者甚至出现关节畸形，严重影响患者生活质量［1，2］。其病理变化主要涉及细胞外基质的分解或分解与合成的失衡，以及炎症细胞因子诱导软骨细胞破坏和凋亡［3，4］。研究表明，OA中炎症因子表达的变化与软骨细胞凋亡之间存在密切联系［5］。

众多研究已证实，脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）是革兰氏阴性菌细胞壁的一种化合物，其通过增强炎症因子的表达，如 IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α等，来引起机体的炎症反应，而且在体内和体外均可以发挥作用［6］。ATDC5作为小鼠源性软骨细胞，已被广泛用于软骨细胞体外实验模型中［7］。MicroRNA（miRNA）是一类具有高度保守性的内源性非蛋白编码的小分子RNA，大小约19-25nt，通过与靶基因的mRNA分子的3’端非编码区结合，抑制靶基因翻译的进程［8］。研究表明，miRNA在OA中有重要作用，可以通过不同的信号通路参与调节炎症因子导致软骨细胞基质降解的过程，而且miRNA能够调控软骨的代谢和修复过程［9］。

在OA的研究中，LPS处理后的ATDC5细胞作为细胞损伤模型已广泛应用［10，11］。研究细胞损伤模型中miRNA的表达差异，可以推测其在OA中所起的作用，为进一步研究治疗OA的新靶点提供方向。

1 资料与方法

1.1 实验材料

小鼠源性ATDC5软骨细胞系，胎牛血清、DMEM/F12培养基（美国BI公司），胰蛋白酶（美国Gibco公司），脂多糖（武汉塞维尔公司），总蛋白提取试剂盒（上海康成公司），兔抗……