错配修复（ＭＭＲ）蛋白（ＭＬＨ１、ＰＭＳ２、ＭＳＨ２和ＭＳＨ６）表达与子宫内膜癌临床病理特征和预后相关性分析

黄金长 肖英 黄雪梅

[摘要] 目的 分析错配修复（MMR）蛋白表达与子宫内膜癌临床病理特征和预后相关性。 方法 选取我院2018年2月至2020年5月收治的70例子宫内膜癌（UCEC）患者，采用免疫组化法对4种蛋白（MLH1、PMS2、MSH2和MSH6）表达情况进行检测，并将4种MMR蛋白中1种及以上表达缺失判定为错配修复基因缺陷（dMMR），全部阳性则判定为错配修复基因完整（pMMR）。检测UCEC患者MMR蛋白缺失情况并对其与病理特征的关系进行分析。 结果 4种MMR蛋白表达均定位于肿瘤细胞核，可作为内对照;dMMR组与pMMR组年龄、病理组织学类型、临床分期及淋巴结转移等比较，差异有统计学意义（P<0.05），表现为dMMR组发病年龄低、肿瘤分期低、淋巴结转移少见。 结论 dMMR子宫内膜癌比例较低，且MLH1和PM52蛋白表达缺失与MSH2和MSH6相比较为多见。MLH1和PMS2、MSH2和MSH6常协同表达或缺失。MMR蛋白与UCEC临床病理特征关系密切。MMR蛋白对预测UCEC的恶性程度、临床预后及UCEC发病机制方面有指导意义。

[关键词] 子宫内膜癌;错配修复;免疫组化;病理特征

[Abstract] Objective To analyze the correlation between expressions of mismatch repair（MMR） proteins and clinicopathological features and prognosis of endometrial carcinoma. Methods A total of 70 patients with uterine corpus endometrial carcinoma（UCEC） admitted to our hospital from February 2018 to May 2020 were selected， and the expression of four types of MMR proteins was detected by immunohistochemistry. The loss of expression of one or more of the four types of MMR proteins（MLH1， PMS2， MSH2 and MSH6） was judged as different mismatch repair（dMMR） gene defect， and all positive MMR proteins were judged as a complete mismatch repair gene（pMMR）. The MMR protein deletion in patients with UCEC was detected and its relationship with pathological features was analyzed. Results The expression of four MMR proteins were located in tumor nuclei and could be used as internal control.There were statistically significant differences between the dMMR group and the pMMR group in onset age， histological type， clinical stage and lymph node metastasis， etc，the difference was statistically significant（P<0.05）. In the dMMR group，the age of onset was low， the stage of tumor was low， and lymph node metastasis was rare. Conclusion The rate of endometrial carcinoma in dMMR is low， and the loss of MLH1 and PM52 protein expression is more common than MSH2 and MSH6.The MLH1 and PMS2， MSH2 and MSH6 are often co-expressed or absent. MMR protein is closely related to the clinicopathological features of UCEC. MMR protein has guiding significance in aspects of predicting the malignant degree， clinical prognosis and pathogenesis of UCEC.

[Key words] Endometrial carcinoma; Mismatch repair; Immunohistochemistry; Pathological features

子官內膜样腺癌中的错配修复（Mismatch repair，MMR）蛋白缺陷患者具有一些显著不同于传统Ⅰ型与Ⅱ型癌的特征，肿瘤具有显著的宿主炎症反应，主要表现为肿瘤周围淋巴细胞及肿瘤浸润淋巴细胞炎症，伴微囊性、伸长及碎片状（Microcystic，elongated and fragmented，MELF）浸润方式。子宫内膜样腺癌通常伴有纤维黏液样间质或富含炎性细胞间质：特殊的病理形态常具有隐弊性。两者在病理形态上有一定的相似性，且伴MELF浸润的子宫内膜样腺癌与错配修复蛋白表达缺失均与FIGO分期、子宫深肌层浸润、淋巴结转移率高及淋巴管血管侵犯相关[1-2]。本研究采用免疫组化法对（Uterine corpus endometrial carcinoma，UCEC）患者标本进行MMR蛋白MLH1、MSH2、MSH6及PMS2检测，并对其与临床特征的关系进行分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院2018年2月至2020年5月收治的70例子宫内膜癌（Uterine corpus endometrial carcinoma，UCEC）患者，年龄53～76岁，平均（64.59±3.28）岁。所有患者均行病理学活检切片检查，并经两位资深病理医师进行诊断。其中错配修复基因缺陷（Deficent mismatch repair，dMMR）患者24例，错配修复基因完整（Proficient mismatch repair，pMMR）患者46例。纳入标准：符合子宫内膜癌诊断标准。排除标准：失访患者;不愿配合患者。

本研究在赫尔辛基宣言下，其研究内容、研究方法、研究意义均通过我院医学伦理委员会进行审批，并最终同意本次研究进行。同时，所有患者与患者家属对本次研究详细过程与研究意义均已知晓，并在患者及家属同意下，自愿签署知情同意书。

1.2 方法

所有标本均采用4%中性甲醇液进行固定，并采用石蜡进行包埋、HE染色。免疫组化采用Max Vision二步法，石蜡切片脱蜡、水化后PBS冲洗，过氧化物酶阻断剂封闭内源性过氧化酶活性，加入一抗，室温孵育，加入生物素标记的二抗，加入链霉素抗生物素的过氧化酶溶液，孵育后滴加DAB显色，苏木素复染，常规脱水、透明、封片。MLH1、MSH2、MSH6及PMS2均购于福州迈新生物技术开发有限公司。

1.3 观察指标

MLH1、MSH2、MSH6及PMS2均定位于细胞核。在对照组织（即肿瘤周围的正常上皮细胞、肿瘤内浸润的淋巴细胞、间质细胞均出现细胞核着色）中～强阳性前提下可作为内对照。将4种MMR蛋白中的1种及以上表达缺失判定为dMMR组，全部阳性判定为pMMR组。

1.4 统计学方法

采用SPSS 17.0统计学软件处理数据，各组间MMR蛋白表达与UCEC临床病理特征参数关系采用Pearson χ2检验。MLH1和PMS2缺失表达与MSH2和MSH6缺失表达采用Spearman等级相关性分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MMR蛋白表达情况

4种MMR蛋白表达均定位于肿瘤细胞核，可作为内对照。见表1。子宫内膜样腺癌MLH1、MSH6、PMS2蛋白缺失免疫组的图片见封三图5～7。

2.2 MMR蛋白表达与UCEC临床病理特征的关系

dMMR组与pMMR组病理年龄、病理组织学类型、临床分期及淋巴结转移等比较，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

3 讨论

MMR蛋白缺陷患者具有一些显著不同于传统Ⅰ型与Ⅱ型癌的特征，肿瘤具有显著的宿主炎症反应，主要表现为肿瘤周围淋巴细胞及肿瘤浸润潮巴细胞炎症。伴微囊性、MELF浸润方式子宫内膜样腺癌通常伴有纤维黏液样间质或富含炎性细胞间质，特殊的病理形态常具有隐弊性。两者在病理形态上有一定的相似性，且伴MELF浸润的子宫内膜样腺癌与错配修复蛋白表达缺失均与FIGO分期、子宫深肌层浸润、淋巴结转移率高及淋巴管血管侵犯相关。

UCEC是临床中较为常见的恶性肿瘤，对患者健康造成严重威胁。通常情况下，UCEC患者到癌症晚期大多都不会出现明显临床症状，极易导致患者预后不良。虽然在早期可通过手术或放化疗对患者进行治疗，但UCEC患者只有少数可在早期得到确诊[3-4]。

MMR系统在临床中首先从大肠杆菌中被发现，其主要依靠MutH、MutL、MUtS等基因编码酶分子，对碱基发生的错配进行矫正。人体MMR系统也可用于对DNA期间发生的碱基错配进行修复，从而有效的对基因组的稳定进行维持。本研究显示，MMR基因发生突变或蛋白缺失的情况发生时，会导致基因突变的发生率增加，从而促使肿瘤的发生[5-6]。

邱春华等[7]的研究显示，当MMR蛋白进行基因错配修复时，会产生不同的作用，包括识别、结合、水解错配的碱基对等，且彼此结合并产生相互之间的影响。而MSH2蛋白则可与MSH6或者是MSH3蛋白相互结合，从而化为二聚体。而MSH2-MSH6异二聚体可识别、结合单个错配碱基对或重复单核苷酸继而在错配部位形成相互作用，形成滑动夹，这一过程需要消耗一定的能量。随后核酸内切酶活性的异二聚体则与MutS-DNA等酶与抗原共同作用行错配碱基修复，合成新的DNA链。因此，研究认为，MMR在基因修复过程中，可通过对不同的聚体、抗原、酶等相互作用，通过对能量进行消耗，从而达到对DNA链进行修复的目的[8-9]。

临床上，根据子宫内膜癌特点可将其分为遗传性与散发性两种，而散发性是临床中较为常见的类型[10-11]。在对患者的临床诊断中，免疫组织化学法已被广泛运用于临床诊断中，且具有较高的可靠性[12-13]。

本研究中，针对错配修复蛋白（MLH1、PMS2、MSH2和MSH6）表达与UCEC临床病理特征与预后相关性进行研究，得出以下研究结果：4种MMR蛋白表达均定位于肿瘤细胞核，可作为内对照;dMMR组与pMMR组年龄、病理组织学类型、临床分期及淋巴结转移等比较，差异有统计学意义（P<0.05）。通过本次研究可为临床诊断提供可靠参考价值，能通过MMR蛋白表达对患者错配修复基因是否存在缺失进行判断，从而为患者预后判断提供一定的参考依据[14-15]。

综上所述，错配修复蛋白（MLH1、PMS2、MSH2和MSH6）表达与UCEC临床病理特征与预后相关性，能为UCEC患者预后提供可靠的参考依据。

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（收稿日期：2020-09-07）