葡萄糖调节蛋白94在膀胱肿瘤中的表达及其对膀胱肿瘤细胞生物学行为的影响

卢童 徐康

膀胱肿瘤是泌尿外科中最常见的恶性肿瘤[1]，其发病率在肿瘤疾病谱中居前10位[2]。膀胱尿路上皮癌是其中最常见的病理类型[3]，其有易复发、侵袭性较强的特点，严重危害人类健康。目前，在肿瘤治疗的领域里，基因治疗已成为重要的研究方向，寻找合适的靶基因进行调控则是基因治疗的重要策略之一[4]。葡萄糖调节蛋白94(glucose-regulated protein 94, GRP94)是一类重要的分子伴侣蛋白，在避免细胞进入程序性死亡，维持细胞增殖方面发挥着重要作用[5]。以往研究表明，GRP94在多种实体肿瘤中呈高表达，并与肿瘤进展密切相关[6-10]，因此具备成为肿瘤治疗靶基因的潜力。本研究中，我们检测了GRP94在膀胱肿瘤组织中的表达情况，并特异性下调GRP94在膀胱尿路上皮癌细胞株SW780内的表达，观察其对SW780细胞凋亡及迁移能力的影响，初步探讨了其作用机制。

材料与方法

一、免疫组化检测

选取2017年6月至2020年6月在我院泌尿外科因膀胱尿路上皮癌行膀胱根治性切除术患者的35例膀胱尿路上皮癌组织作为实验组，同时将此35例患者的癌旁组织作为阴性对照组，均进行免疫组化染色。基本步骤如下：所有组织经固定、石蜡包埋后制作成5 μm切片，经脱蜡入水、过氧化氢阻断并行抗原修复后，使用anti-GRP94抗体孵育，随后经洗脱、二抗孵育并显色，并在显微镜下随机选取3个视野，拍照后应用图像分析系统采集GRP94在相应组织内表达的平均光密度值。

二、小干扰RNA(small interfering RNA targeting GRP94, siGRP94)合成

本研究中设计并合成了2组小RNA，其中可靶向结合GRP94 mRNA的siGRP94序列为：正义链5′-GAAGAAGCAUCUGAUUACC-3′，反义链5′-GGUAAUCAGAUGCUUCUUC-3′，序列长度19 bp。……