核转录因子NFAT5对LPS致伤小鼠肾集合管细胞iMCD3的影响

张丹凤， 严尚学， 王德光

近年来抗生素的应用以及支持治疗手段在不断改善，脓毒症(Sepsis)的发病率依然逐年递增，成为重大公共健康问题。据美国NIH统计，每年脓毒症发病人数在百万以上，并造成20万人死亡。肾脏是脓毒症最常受损器官之一。大约50%脓毒症休克患者会并发急性肾功能衰竭。目前脓毒症导致急性肾损伤(acute kidney injury, AKI)的发病机制尚不明确，更没有很好的对策。激活T细胞核因子5 (nuclear factor of activated T cells 5，NFAT5) 是核转录因子，与NF-κB同属于Rel-like结构体家族，最早发现该因子对高渗透压引起的损害具有保护作用，近年来大量研究表明NFAT5与炎症的发病机制有关，NFAT5参与介导高盐敏感性高血压、类风湿关节炎、冠状动脉粥样硬化糖尿病微血管病变(肾病及视网膜病变)疾病的炎症反应。Küper et al近期研究表明在脓毒症小鼠中NFAT5通过调控集合管细胞中Aqua2和CIC-2的转录和合成，降低尿渗透压。目前尚无研究阐明NFAT5在脓毒症并发急性肾损害炎症瀑布效应产生过程中的作用及是否参与介导肾小管细胞炎症因子的产生。该实验通过研究NFAT5在脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激的小鼠肾小管细胞iMCD3中炎症的调节作用，探讨NFAT5是否可以成为治疗败血症并发急性肾损害的新靶点。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1

实验细胞 小鼠肾集合管细胞iMCD3购自美国ATCC细胞库。

1.1.2

实验试剂与仪器 DMEM培养基购自introvigen公司(德国)，反转录试剂盒购自Promega公司(德国)，NFAT5抗体和Beta actin抗体均购自Santa cruz公司(美国)，histone3 抗体购自Enzo life science公司，Lipofectamine 2000购自Invitrogen公司(美国)，NFAT5 siRNA和Control siRNA 购自Santa Cruz公司(美国)，ElISA试剂盒购自R&D systems公司(美国)，Premix taqman引物购自Thermo Scientific公司(美国)，染色质免疫共沉淀试剂盒(SimpleChIP® Plus Sonication Chromatin IP Kit)购自Cell signaling公司(德国)。……