国外引进辣椒DNA表观遗传多样性分析

徐小万，夏碧波，吴智明，田永红

（1.广东省农业科学院蔬菜研究所/广东省蔬菜新技术研究重点实验室，广州510640；2.仲恺农业工程学院园艺园林学院，广州510225）

作物育种能否取得突破性的成就取决于关键性种质资源的开发利用，种质资源成为作物杂交育种成功的重要因素［1］。依据外观形态鉴别辣椒（Capsi⁃cumspp.）种质资源的亲缘关系已有大量例子，随着生物技术的发展利用分子标记技术，如RFLP［2］、RAPD［3，4］、ISSR［5，6］、AFLP［7］、SSR和SRAP［8］，研究者利用这些分子标记技术开展了辣椒种质资源亲缘关系和遗传多样性分析，均取得了较好成绩。DNA甲基化在基因表达调控和基因组防御2个方面发挥了重要作用［9］，是现代表观遗传学研究中的热点和主要内容。近年来，随着分子生物学的发展DNA甲基化的检测方法越来越多，较简单的方法是甲基化敏感扩增多态性（Methylation-sensitive amplified poly⁃morphism，MSAP），而MSAP是基于AFLP基础上建立起来的技术，在水稻［10］、蔬菜［11，12］、毛竹［13］等植物DNA甲基化模式或程度上已被广泛使用。本研究利用MSAP技术以国外引进的30份辣椒种质资源作为研究对象进行辣椒基因组CCGG甲基化位点多态性分析，以期为辣椒种质的分类鉴定以及种质资源科学利用提供表观遗传基础。

1 材料与方法

1.1 材料

30份辣椒种质资源由广东省农业科学院蔬菜研究所茄果类研究室提供，均引自马来西亚，其中8份资源田间表现抗疫病和青枯病，编号分别为156、159、162、163、168、181、182和198。

1.2 叶片DNA的提取

在辣椒苗期于第七片或第八片真叶时采集新鲜叶片，用于辣椒基因组DNA提取，提取方法参照CTAB法［1］。

1.3 MSAP反应体系

限制性酶切及连接反应，用EcoRⅠ/HpaⅡ组合和EcoRⅠ/MspⅠ组合分别酶切同一辣椒基因组DNA，酶切连接一步反应，混匀后离心数秒，37℃保温5 h，8℃保温4 h，4℃过夜。……