外源高表达miR-133b抑制骨肉瘤的增殖与转移

陈鹏业，孙建伟，刘跃贞，陆丽峰

骨肉瘤(OS)是一种侵袭性骨肿瘤，其特征主要是恶性类骨质生成和成骨细胞分化。治疗方式以手术切除为主，但多数OS患者的预后不良。随着顺铂、多柔比星、异环磷酰胺以及甲氨蝶呤在OS的新辅助化疗中的应用，患者的5年生存率已增加至50%～80%[1]。但是，OS发病机制和病因仍未明确阐明。MicroRNA(miRNA或miR)是一种长度为22～24个核苷酸的短链保守非编码RNA，被认为是一种应用前途极广的恶性肿瘤诊断和预后工具。miRNA通过与互补靶mRNA结合，导致mRNA降解或阻止mRNA被翻译。故miRNA在转录后水平调节靶基因的表达。miRNA的过表达通常导致靶基因的死亡表达。有证据显示98种miRNA位于脆弱位点和癌症基因组区域，表明miRNA与肿瘤发生、进展密切相关[2]。通过介导癌基因或肿瘤抑制因子的表达，miRNA在肿瘤生长、进展、转移和耐药性中发挥关键作用[3]。

miR-133b是miR-133家族的成员，被称为肌肉特异性miRNA，介导成肌细胞增殖和分化。最近，miR-133b也在肌源性肉瘤中被发现。此外，miR-133b在胃癌、结直肠癌、膀胱癌、前列腺癌和肺癌中的表达降低，表明miR-133b在肿瘤发生和癌症进展中起重要作用[3-5]。然而，miR-133b在骨肉瘤中的表达和功能尚不清楚。本研究采用MTT、划痕实验及Taswell侵袭实验检测miR-133b在骨肉瘤细胞中的生物学行为，现总结报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料 人骨肉瘤qRT-PCR检测人骨肉瘤细胞系(MG-63)细胞与人正常成骨细胞系(hFOB)购置于美国ATCC公司，Lipofectamine 2000、miR-133b mimics、scramble、MTT粉、Transwell小室购于美国Invitrogen公司。

1.2 qRT-PCR检测miR-133b的表达 采用RNA抽提试剂盒抽提MG-63与hFOB细胞中的总RNA，借助于逆转录相关设备，进行cDNA的合成，并将其存储在-70 ℃环境中，考虑到实际的研究需求以及临床表征，对PCR扩增体系进行必要的优化调整，通过必要的设备、试剂增加，提升扩增反应的实际效果。……