乌金口服液对兔离体小肠平滑肌收缩的影响及机制研究

王君君，朱 莉，宋予震，李月勤

(河南牧业经济学院 动物医药学院，河南 郑州 450046)

《本草纲目》记载：乌金石又名石炭，可用于治疗“误吞金银在腹中不下者”、“腹中积滞”。乌金口服液，是从乌金石内提炼出来的经现代工艺加工制成的中药制品，黄腐酸是乌金石有效成份中能溶于水、分子量最小的部分[1]。1998年，我国卫生部批准了中药成方制剂——乌金口服液，该产品中含0.1%黄腐酸，是我国首次经国家认可的药用黄腐酸制剂[2]。乌金口服液属于处方合剂，具有温阳散寒、健脾益胃、活血化瘀等功效，临床一般用于治疗胃寒疼痛，脾虚泄泻及脾不统血所致的出血，胃及十二指肠溃疡、出血，气血瘀滞所引起的高血压等症[3]。

中医药是我国的文化瑰宝，其防治疾病具有独特的优势，目前众多研究者都青睐于从中药中寻找防治疾病的新药。研究发现，机体小肠运动异常是脾气虚的常见症状[4]，乌金口服液具有调节脾胃的功效，但乌金口服液对动物肠道机能的影响研究甚少。本实验以家兔离体小肠平滑肌为研究对象，以平滑肌收缩张力和幅度为指标，观察乌金口服液对兔离体小肠平滑肌收缩的影响，以初步探讨其作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物

健康家兔9只，体重2～2.5 kg，雌雄不限，由河南牧业经济学院实验动物中心提供。

1.2 药品及试剂

乌金口服液(江苏平光制药有限公司)；盐酸肾上腺素注射液和阿托品注射液(吉林省华牧动物保健有限公司)；台氏液，配制方法：NaCl 8.0 g、KCl 0.2 g、CaCl20.2 g、NaHCO31.0 g、NaH2PO4·2H2O 0.07 g、MgSO40.13 g、葡萄糖 1.0 g，加蒸馏水至1000 mL，搅拌至充分溶解，4 ℃存放。

1.3 实验仪器

BL-420型生物信号采集处理系统、FT-100型张力传感器和HW-400E恒温平滑肌试验系统购自成都泰盟科技有限公司，DK-98-Ⅱ型电热恒温水浴锅购自天津市泰斯特仪器有限公司。

1.4 实验方法

1.4.1 离体小肠平滑肌制备

试验前将家兔禁食24 h，用钝器敲击头部，快速处死家兔，迅速剖开腹腔，在胰腺导管开口处附近，剪取十二指肠约1.5 cm，用台氏液冲洗去除肠内容物后，放入38 ℃新鲜台氏液中通气备用。

1.4.2 实验装置连接

取两端均用线结扎过的离体肠管，一端固定于通气钩上，另一端用线固定于张力换能器。在(38±0.5)℃条件下，调节平滑肌浴槽中气泡大小，不断往台氏液中通气，以保持肠管活性。用BL-420生物信号采集处理系统记录肠管的收缩曲线，观察在正常情况下离体肠管的收缩情况。

1.4.3 实验处理

待离体肠管的自动节律性收缩曲线稳定后，加入剂量分别为0.35 mL、0.7 mL、1.4 mL的乌金口服液，使平滑肌水浴槽溶液中其终浓度分别为0.0172 mg/mL、0.0338 mg/mL、0.0654 mg/mL，做好加样标记，分别观察2 min，以收缩张力(g)、舒张张力(g)、收缩振幅(g，收缩张力-舒张张力)为指标，观察记录十二指肠的收缩变化情况。每种浓度药液试验结果记录完毕，用等温的台氏液冲洗肠管3次，每次2 min，待十二指肠运动恢复正常后再做下一项。

待离体肠管的自动节律性收缩曲线稳定后，在平滑肌水浴槽中分别加入肾上腺素0.1mL(终浓度为0.0050 mg/mL)和阿托品0.1 mL(终浓度为0.0050 mg/mL)预处理2 min，记录离体小肠平滑肌的收缩张力(g)、舒张张力(g)、收缩振幅(g，收缩张力-舒张张力)的变化情况。待收缩稳定后，再加入乌金口服液0.7 mL(终浓度为0.0338 mg/mL)，处理2 min，以收缩张力(g)、舒张张力(g)、收缩振幅(g，收缩张力-舒张张力)为指标，观察记录小肠收缩变化情况。

1.5 数据处理

试验数据用平均数±标准差(X±SD)表示，组间数据采用t检验。

2 结果

2.1 不同浓度的乌金口服液对离体小肠平滑肌收缩作用的影响

在离体小肠平滑肌恒温水浴槽中添加不同剂量的乌金口服液，使其终浓度分别为0.0172 mg/mL、0.0338 mg/mL、0.0654 mg/mL，利用BL-420生物信号采集系统记录离体小肠平滑肌的收缩张力和振幅的变化情况。结果发现，不同浓度的乌金口服液对兔离体小肠平滑肌的收缩张力和振幅均有影响。其中乌金口服液终浓度0.0172 mg/mL处理组与给药前相比，收缩张力、振幅差异极显著(P<0.01)；乌金口服液终浓度0.0338 mg/mL处理组与给药前相比，收缩张力、振幅差异极显著(P<0.01)；乌金口服液终浓度0.0654 mg/mL处理组与给药前相比，收缩张力、振幅差异极显著(P<0.01)，实验结果见表1和图1。由此可见乌金口服液能显著增强兔离体小肠平滑肌的收缩功能。

图1 不同浓度乌金口服液对家兔离体小肠收缩的影响

2.2 乌金口服液对经盐酸肾上腺素预处理后的兔离体小肠平滑肌收缩的影响

在离体小肠平滑肌恒温水浴槽中添加0.1 mL盐酸肾上腺素溶液(终浓度为0.005 mg/mL)预处理2 min，然后再添加0.7 mL乌金口服液，使其终浓度为0.0338 mg/mL，观察2 min，利用BL-420生物信号采集系统记录离体小肠平滑肌的收缩张力和振幅的变化情况，结果发现，肾上腺素的预处理使兔离体小肠平滑肌的收缩张力、振幅显著减小(P<0.01)，表明肾上腺素能够显著抑制兔离体小肠平滑肌的运动。再加入乌金口服液后，兔离体小肠平滑肌的收缩张力、振幅显著增强(P<0.01),结果见表2和图2。实验结果表明，乌金口服液能显著改善肾上腺素抑制家兔离体小肠平滑肌的收缩，提高肠管收缩张力和振幅，恢复肠管运动。

表2 肾上腺素与乌金口服液作用对家兔离体小肠运动的影响(X±SD)

图2 肾上腺素与乌金口服液作用对家兔离体小肠运动的影响

2.3 乌金口服液对阿托品预处理后的兔离体小肠平滑肌收缩的影响

在离体小肠平滑肌恒温水浴槽中添加0.1 mL阿托品(终浓度为0.0050 mg/mL)预处理2 min，然后再添加0.7 mL乌金口服液，使其终浓度为0.0338 mg/mL，观察2 min，利用BL-420生物信号采集系统记录离体小肠平滑肌的收缩张力和振幅的变化情况，结果发现阿托品的预处理使兔离体小肠平滑肌的收缩张力、振幅显著减小(P<0.01)，表明阿托品能显著抑制兔离体小肠平滑肌的收缩，再加入乌金口服液处理后，兔离体小肠平滑肌的收缩张力、振幅显著增强(P<0.01),实验结果见表3和图3。结果表明，乌金口服液能显著改善阿托品抑制家兔离体小肠平滑肌的收缩，提高肠管收缩张力和振幅，恢复肠管运动。

表3 阿托品与乌金口服液对家兔离体小肠运动的影响(X±SD)

图3 阿托品与乌金口服液对家兔离体小肠运动的影响

3 讨论

乌金口服液是从乌金石中提取的有效成份黄腐酸钠制成，亦称黄腐酸钠口服液，具有止血、活血、保护胃肠粘膜等功效[5]。有研究表明黄腐植酸能提高小龙虾的生产性能[6]。本研究发现，不同浓度的乌金口服液能极显著增强家兔离体小肠平滑肌的收缩张力、运动振幅，从而增强兔离体小肠的运动，表明乌金口服液具有促进小肠运动，推动肠内容物向下运动，改善腹泻、腹痛等的功效。这与《本草纲目》中所记载的用于治疗“误吞金银在腹中不下者”“腹中积滞”的功效相一致。

胃肠道平滑肌痉挛性收缩引起的腹痛、腹泻在临床上很常见，因此胃肠道平滑肌的研究具有非常重要的生物学意义。哺乳动物小肠平滑肌的运动受神经系统的调节，分别是外来神经丛(自主神经交感和副交感神经)和内在神经丛(又称为壁内神经丛)，其中壁内神经丛对小肠运动起主要作用，当机械或化学刺激作用于肠壁感受器时，通过局部反射可引起平滑肌蠕动，切断外来神经，小肠的蠕动仍可进行[7]。小肠平滑肌在离体情况下仍可以保持活性，因此，在本实验中采用平滑肌水浴槽恒温孵育家兔离体小肠平滑肌，以研究乌金口服液对动物小肠运动的影响及其机制。

研究发现，哺乳动物胃肠道平滑肌中存在M胆碱能受体、HA受体、5-HT受体等多种受体，且利用Ach、HA处理均能引起肠管平滑肌痉挛性收缩[8]。此外，张琨茹等[9]研究发现，哺乳动物消化道平滑肌中还存在α肾上腺素能受体。乙酰胆碱可通过激活消化道平滑肌上的M胆碱能受体，引起平滑肌收缩，而肾上腺素可激动α肾上腺素能受体，降低平滑肌收缩的兴奋性[10,11]。本实验研究乌金口服液对家兔离体小肠运动的影响，并利用肾上腺素(α肾上腺素能受体激动剂)和阿托品(M胆碱能受体阻断剂)预处理来研究乌金口服液影响小肠平滑肌运动的机制。实验结果表明，离体小肠平滑肌浴槽中分别加入一定量的肾上腺素和阿托品，离体小肠平滑肌的运动振幅和收缩张力均受到明显的抑制，再添加乌金口服液进行处理时，离体小肠平滑肌的运动振幅、收缩张力均明显增强，说明乌金口服液可以明显改善肾上腺素、阿托品对离体小肠运动收缩张力及振幅的抑制作用。由此推测，乌金口服液具有拮抗肾上腺素对α肾上腺素能受体的激动作用、抑制阿托品对M胆碱能受体的阻断作用，从而促进小肠运动。但目前乌金口服液对离体小肠运动影响的研究较少，仍需进一步研究其作用机制。

综上所述，乌金口服液具有促进家兔离体小肠平滑肌运动的作用，其作用机制可能与小肠平滑肌上的α肾上腺素能受体、M胆碱能受体有关。