香菇微卫星标记变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的应用及正交优化

张丹 颜梦秋 张美彦 谭琦 宋春艳 尚晓冬

摘要：变性聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种高效鉴定微衛星分子标记的方法，广泛应用于种质鉴定、遗传连锁图谱构建及分子标记辅助育种等研究中。该方法由于操作繁琐，目前在食用菌领域的应用尚不广泛。以香菇为研究对象，建立变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的检测流程，并利用正交试验对检测流程中涉及的加样缓冲液与PCR反应液的体积比、95 ℃变性时间、置于冰上冷却时间、银染时间、银染后胶板去离子水洗时间等5个操作节点进行优化。结果表明，加样缓冲液与PCR反应液体积比为1 ∶2，95 ℃变性2～5 min，置于冰上冷却15～20 min，银染7 min，银染后胶板用去离子水洗5～10 s是正交试验的较优处理组合。试验建立了香菇微卫星标记变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测操作规程，该操作规程具有成本低、效率高、易批量化操作等优点，对其他食用菌微卫星标记的应用具有重要的参考价值。

关键词：香菇;变性聚丙烯酰胺凝胶电泳;微卫星标记;正交试验设计;银染试验

中图分类号：S646.1+20.1 文献标志码： A

文章编号：1002-1302（2021）05-0057-05

微卫星标记别称简单重复序列（simple sequence repeat，简称SSR）标记是目前普遍使用的分子遗传学标记，具有多态性高、共显性、检测重复性好、基因组中广泛分布等优点。近年来，随着全基因组测序技术的不断发展，SSR标记已广泛应用于动植物遗传图谱的构建、数量性状座位（quantitative trait locus，简称QTL）定位、分子遗传多样性等研究。SSR标记扩增产物的检测方法主要有荧光标记引物测序法、同位素标记引物的聚丙烯酰胺凝胶电泳法、琼脂糖凝胶电泳法、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法等，其中变性聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染检测法被认为是精度最好的鉴定方法。……