乳腺癌中β-catenin的表达及临床意义

郑 炎，肖大树，朱 楠，李文清，曹立宇

近年乳腺癌的发病出现年轻化趋势且病死率较高，大多数病例发现时已为晚期[1]。如何治疗乳腺癌，有效评估疗效，正确评价预后已受到广泛关注。乳腺癌的进程复杂，有多种分子及多条信号通路参与其中。大多数乳腺癌患者接受各种形式的新辅助治疗或辅助治疗，以减少复发和提高总生存率，但疗效并不令人满意。因此，寻找新的预后标志物将有助于更好地应对这一难题，并有助于治疗决策[2]。研究表明，经典的Wnt/β-catenin信号通路在大多数人类癌症中起调节作用。β-catenin主要通过促进肿瘤细胞的增殖、分化和转移方面起到作用。Wnt信号异常激活常导致β-catenin核的积累[3]，入核的β-catenin会激活T细胞因子/淋巴增强因子并形成复合体，触发下游靶基因的异常表达作用于细胞，最终导致肿瘤的发生。Wnt信号通路的异常活化参与肿瘤的发生、发展及转移过程[4]。目前，关于Wnt/β-catenin信号通路在乳腺癌发病机制中的研究较少，本实验采用免疫组化法检测乳腺浸润性癌、乳腺导管内癌以及乳腺正常组织中β-catenin蛋白的表达，探讨其在乳腺癌生物学行为判断和预后评估中的应用价值。

1 材料与方法

1.1 临床资料收集2018年1月～2020年8月安徽医科大学附属巢湖医院病理科存档的149例乳腺组织标本，其中正常乳腺组织30例，乳腺导管内癌33例，乳腺浸润性癌86例。纳入标准：(1)所有病例均经病理学诊断，由2名病理医师对结果进行判读，以病理结果作为诊断依据；(2)具有完整的临床病理资料和辅助检查资料。排除标准：(1)存在严重的心、肺、肝、肾功能异常病史；(2)患者在接受检查前进行过相关医学治疗(如放疗或化疗等)。

1.2 主要试剂与仪器β-catenin鼠单克隆抗体(MX043，福州迈新公司)，EDTA抗原修复液(pH 9.0，MVS-0099)，PBS缓冲液(PBS-0060，pH 7.4～7.6)和MaxVision检测试剂盒均购自福州迈新公司。

1.3 免疫组化石蜡切片常规脱蜡，3%H2O2孵育20 min，PBS冲洗，直接煮沸EDTA抗原修复液进行抗原修复，PBS冲洗3次；阻断内源性过氧化物酶，室温下孵育10 min，滴加一抗孵育60 min，加入100 μL酶标羊抗小鼠/兔IgG聚合物Ⅲ室温下孵育15 min，PBS冲洗3次；DAB显色；自来水冲洗，苏木精复染，脱水封片，镜下观察。用PBS代替一抗作为阴性对照。β-catenin在正常组织细胞膜连续着色，癌组织中为胞质、胞核异常着色。染色结果判断标准分别从胞膜、胞质和胞核判定，胞膜阳性>70%为正常表达，否则为表达减少；胞质或胞核阳性>10%为异位表达；异位表达与表达减少均为异常表达。

1.4 统计学分析采用SPSS 21.0软件进行统计学分析。采用χ2检验分析计数资料，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 乳腺组织中β-catenin蛋白的表达免疫组化结果显示，β-catenin在正常乳腺组织细胞胞膜表达，在乳腺导管内癌及乳腺浸润性癌细胞胞膜的表达不同程度减少，而在胞质和胞核中存在异常表达(图1)。

2.2 正常乳腺、乳腺导管内癌和乳腺浸润性癌中β-catenin的表达β-catenin在86例乳腺浸润性癌中的异常表达率为66.2%(57/86)，在正常乳腺组织中的异常表达率为6.7%(2/30)，在乳腺导管内癌组织中的异常表达率为24.2%(8/33)。与正常乳腺组织相比，乳腺浸润性癌中的β-catenin异常表达率升高，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.3 乳腺浸润性癌中β-catenin表达与临床病理特征的关系本组β-catenin表达在患者年龄、肿瘤直径及Ki-67增殖指数方面，差异均无统计学意义(P>0.05，表1)；病理分级Ⅰ级的β-catenin异常表达率26.7%，Ⅱ级为61.8%，Ⅲ级为89.2%，差异有统计学意义(P<0.05)；临床分期Ⅰ+Ⅱ期β-catenin的异常表达率48%，Ⅲ+Ⅳ期为88.9%，差异有统计学意义(P<0.05)；无淋巴结转移组的β-catenin异常表达率为51%，淋巴结转移组为86.4%，差异有统计学意义(P<0.05)；在E-cadherin有无异常表达、HER-2扩增情况方面，差异均有统计学意义(P<0.05，表1)。

表1 乳腺浸润性癌中β-catenin表达与临床病理特征的关系[n(%)]

3 讨论

本实验探讨了β-catenin在正常乳腺组织、乳腺导管内癌及乳腺浸润性癌中的表达，同时分析β-catenin表达与乳腺浸润性癌临床病理特征的关系。结果显示β-catenin在正常乳腺组织胞膜阳性，在浸润性癌中阳性部位转移到胞质与胞核中，胞膜阳性会减少。乳腺导管内癌中β-catenin异常表达也明显增高，苗玉等[5]对200例乳腺标本进行研究，在乳腺导管内癌组织中发现β-catenin异常表达，且与其附近的原位和侵袭性成分中β-catenin表达模式高度一致，这也提示β-catenin异常表达可能在乳腺导管内癌与乳腺浸润性癌的发生、发展过程中起一定作用，具体的作用机制尚需要进一步的研究及证实。另外，乳腺浸润性癌中，病理分级Ⅰ级的β-catenin异常表达率低于Ⅱ、Ⅲ级，在临床分期、有无淋巴结转移、E-cadherin有无异常表达、HER-2扩增情况组间，β-catenin异常表达率差异均有统计学意义。

ABCDEF

β-catenin作为经典Wnt信号通路中重要的转录激活因子，可协助E-cadherin共同作用，保持组织结构的完整性与极性。胞膜上β-catenin表达减少会导致E-cadherin依赖性的细胞黏附力降低，癌细胞易从原发部位发生脱离。β-catenin及E-cadherin共同参与上皮-间质转化过程，使上皮细胞失去黏合性和极性，强化了转移和侵袭能力[4]，本实验结果也表明β-catenin及E-cadherin表达呈正相关。Wnt/β-catenin信号通路在生物机体进入、调控细胞增殖分离、极化、凋亡和抗凋亡等过程中作用显著，包括癌症在内的多种疾病和通路的异常相关[6]。有研究证明在食管癌[4]、涎腺癌[7]、非小细胞肺癌[8]、分化型甲状腺癌[9]及口腔鳞状细胞癌中[10]，β-catenin阳性颗粒均主要异常表达于胞质与胞核中。本实验亦发现，β-catenin在正常乳腺组织中呈胞膜阳性，癌组织中胞膜表达减少，阳性颗粒定位于胞质、胞核。其机制可能是Wnt通路参与乳腺癌的发生、发展，当异常情况下Wnt通路被激活，β-catenin由胞膜转移到胞核内，失去介导细胞间链接、黏附的作用，促使其下游转录因子也被激活并引起某些癌基因的转录，进而诱导细胞癌变[11]。

β-catenin的表达作用目前已在不同种类癌症的研究中逐步证实。Su等[12]报道，甲状腺癌中通过β-catenin从胞膜到胞质的移位，胞质中β-catenin蛋白增加，从而激活Wnt通路。高蔷等[13]研究表明，子宫颈癌中β-catenin表达异常，促进子宫颈癌的侵袭及转移，可能提示患者预后不良。本组86例乳腺浸润性癌中，β-catenin异常表达率为66.2%(57/86)，在乳腺导管内癌组织中的表达率为24.2%(8/33)，而在正常组织中的异常表达率为6.7%(2/30)，提示β-catenin异常表达上调可能在乳腺浸润性癌的发生、发展过程中起一定作用。另外，本实验发现33例乳腺导管内癌组织中8例存在β-catenin异常表达，提示其具备成为乳腺浸润性癌过渡阶段诊断标志物的可能性。

鉴于β-catenin在乳腺浸润性癌组织存在异常表达，近期有研究进一步探究了β-catenin蛋白表达与肿瘤临床病理指标的相关性和差异性。β-catenin在临床分期、病理分化及淋巴结有否转移的子宫颈癌[13]及喉癌中的表达有差异。不同肿瘤中β-catenin表达与临床病理指标的关系存在差异，在非小细胞肺癌组织中，β-catenin表达与分化、转移和临床分期有关[14]，但邵宇鑫等[9]研究表明β-catenin在分化型甲状腺癌中的异常表达与淋巴结转移有关，但和临床分期无显著相关性。Zhang等[15]通过实验得出，乳腺癌组织中β-catenin异位表达与组织学分级、临床分期及Ki-67增殖指数有关。本组β-catenin表达与Ki-67增殖指数、肿块大小及患者年龄无明显关联，但在病理分级Ⅱ级(61.8%)和Ⅲ级的β-catenin异常表达率(89.2%)高于Ⅰ级组织(26.7%)，且与临床分期、有无淋巴结转移、E-cadherin有无异常表达及HER-2有无扩增方面存在关联，其中的差异性机制有待于进一步观察。

综上所述，本实验结果显示，β-catenin异常聚集与表达引发的细胞增殖和分化功能失常，最终导致细胞发生癌变，这种变化影响了乳腺癌的进展和转移。此发现可能有助于确定并开发新的治疗靶点，以减少乳腺癌中β-catenin介导的恶性肿瘤，从而开发新的治疗策略。