黑蜂王台病毒基因检测及其病害诊断防治方法

魏菁 肖芳 宋战昀│文

1 黑龙江哈尔滨海关技术中心，150028；2 吉林长春海关技术中心，130062

蜜蜂病毒是威胁蜜蜂健康的最主要因素之一，通过对当前蜜蜂患病调查，有超过25种病毒会对蜜蜂造成威胁，并进一步感染到其他蜜蜂。其中，黑蜂王台病毒是造成蜜蜂患病数量较多的病毒。黑蜂王台病毒专门感染王台内幼虫，当幼虫发病后，王台会逐渐变黑，在蛹期死亡，形成一种与囊状幼虫病十分相似的坚硬的囊。当前黑蜂王台病毒只在西方蜜蜂中发现，我国尚未见类似相关报道，但针对黑蜂王台病毒的预防研究是十分必要的[1]。

一、黑蜂王台病毒基因检测

1.基于核酸序列的黑蜂王台病毒定性

在蜜蜂体内含有一组由基因编码构成的唯一性核酸序列，根据这一序列的特异性，将其作为鉴定蜜蜂是否携带黑蜂王台病毒的重要指标，以此对黑蜂王台病毒进行定性操作[2]。本文采用化学方法，通过人工合成的方式，将采集到的一小段蜜蜂病毒基因互补引物序列进行合成，并通过定量逆转录的方式实施扩增处理，并对黑蜂王台病毒样本中的基因结构进行定性检测。首先，在进行黑蜂王台病毒基因编码特异性诊断过程中，通过采用定量逆转录的方式，结合核酸复制所需的特殊环境，按照相应的比例加入到定量逆转录反应所需的试剂当中，充分搅拌后得到相应的混合溶液。加之核糖核酸中DNA聚合酶作用，将黑蜂王台病毒的核糖核酸分子作为模板进行逆转录，以此合成互补的脱氧核糖核酸。……