基氏蠊螨的18S rDNA分子鉴定

李梦珠，张兰香，詹雨娟，褚凌渺，胡婷婷，李心玫，王严，孙恩涛

皖南医学院检验学院，安徽 芜湖 241002

革螨种类繁多，在自然界中分布广泛，与人类关系密切。革螨可叮咬人的皮肤引起皮炎，少数还可作为媒介传播疾病，也有一些种类可以用于生物防治[1-5]。目前，革螨种类的鉴定主要依靠形态学特征，然而革螨体积微小、形态相似、近缘种较多，仅依靠形态学方法准确鉴定革螨种类十分困难[6]。

随着分子生物学和DNA鉴定技术的不断发展和完善，利用标准基因片段对物种进行快速准确鉴定，可作为传统分类鉴定的有力补充[7]。线粒体基因(COⅠ)、核糖体基因(18S rDNA和28S rDNA)等分子标记被广泛应用于螨类的相关研究[8]。其中，核糖体DNA(rDNA)结构独特，分子量大小适中，且信息量大，是近缘种鉴别和序列分析的理想标志之一[9]。18S rDNA是核糖体DNA的重要组成部分，其不同片段的核苷酸取代率和进化率相对较低，能更好地用于生物体的分类鉴定及系统进化信息的获得[10]。本研究对革螨股、蠊螨科的基氏蠊螨(Blattisociuskeegani，B.keegani)18S rDNA基因序列进行扩增、测序和分析，建立基氏蠊螨的分子鉴定方法。

1 材料与方法

1.1样本采集、分离和形态鉴定 2018年12月，自安徽省芜湖市某储藏物中采集储藏物样本。从采集样本中初步分离革螨，在光学显微镜下挑取单只成螨制成玻片后，进行形态学鉴定[11]。

1.2DNA提取，PCR扩增、克隆和测序 参考Jia等[12]提取DNA的方法，提取单只螨DNA，将提取的DNA样本储存于-20 ℃冰箱中备用。COⅠ基因的扩增引物设计参考Webster[13]，正向引物：5′- GTTTTGGGATATCTCTCATAC-3′，反向引物：5′-GAGCAACAACATAATAAGTATC-3′。18S rDNA基因的扩增引物设计参考N Okhravi[14]，正向引物：5′-GGCGTGCTTAACACATGCAAGTCG-3′，反向引物：5′-GCGGCTGGCACGTAGTTAG-3′。……