miR-140靶向调控SOX2在结肠癌中的作用机制研究

王晓元,赵轶峰,杨永江,黄迪,苏卓彬李坤,李晶晶,李曙光

结肠癌是起源于结直肠黏膜上皮的肿瘤，在过去几十年的治疗中取得了很大的进展，但总体生存时间和5年生存率并没有得到明显的改善[1-2]。结肠癌的发生是一个复杂的过程，因此研究结肠癌肿瘤发生的关键调控因子并探索其机制，寻找新的治疗方法以改善患者预后，具有重要意义[3-4]。微小 RNA(microRNAs，miRNAs)是由19～23个核苷酸组成的小型非编码RNA，是一类表观遗传调控因子，在基因表达谱的调节中发挥至关重要的作用[5-6]。大量研究证明，miRNAs作为基因表达重要的调节分子，在肿瘤的多个过程中具有重要的作用[7-8]。多种 miRNAs 已证实与结肠癌密切相关[9]。如miR-937在结肠癌中表达上调，而miR-143、miR-145在结肠癌中表达降低[10-11]。但miR-140在结肠癌中的功能尚鲜有报道。本研究旨在观察miR-140对结肠癌细胞生物学行为的调控作用，分析miR-140在结肠癌发生发展中发挥的作用。

1 材料与方法

1.1 材料与主要试剂

收集本院74例经手术切除并病理确诊为结肠癌的手术患者肿瘤组织样本及正常癌旁组织标本，所有患者术前均未进行化学治疗。患者并签署知情同意书，研究获得本院伦理委员会批准。人正常结直肠黏膜细胞FHC与结肠癌细胞株SW480、HT29、HCT116购买自中国科学院上海细胞库。miR-140 模拟物阴性对照购买自上海吉玛基因。SOX2一抗(ab97959)、GAPDH抗体(ab9485)、Ki67抗体(ab15580)、IgG二抗(ab150077)购买自Abcam公司。转染试剂 LipofectamineTM2000购买自Invitrogen 公司。qRT-PCR试剂盒、DMEM培养基、胎牛血清、TRIzol® 试剂盒、反转录试剂盒、BCA 蛋白质分析试剂盒均购买自赛默飞世尔科技公司， CCK-8试剂盒购买自日本同仁公司。……