肺腺癌患者胸腔积液程序性死亡配体-1表达与临床病理及表皮生长因子受体基因突变关系研究

马 丽， 吴羽华， 张新勇， 王敬慧， 张树才， 胡 瑛

首都医科大学附属北京胸科医院 肿瘤内科，北京 101149

目前，肺癌发病率与病死率均居于恶性肿瘤首位，且以非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)占比最高[1]。近年来，程序性死亡配体-1(programmed cell death-ligand 1，PD-L1)抑制剂免疫疗法在NSCLC治疗方面显示出良好的临床获益，通过诱导特异性T淋巴细胞活化抑制介导抗肿瘤作用，而PD-L1表达水平是指导临床用药的重要生物标志物[2]。PD-L1表达水平检测主要依靠组织学标本，但对于部分肺癌患者无法获得足够量标本[3]。有报道显示，一半以上肺腺癌患者可进展出现胸腔积液，此类标本制备成细胞学蜡块后可通过免疫组织化学法(immunohistochemistry，IHC)或基因检测进行病理诊断和分子分型，为诊断和治疗提供依据[4]。本研究旨在探讨肺腺癌患者PD-L1表达水平与临床病理资料及表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)基因突变的相关性。现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取首都医科大学附属北京胸科医院自2016年1月至2019年12月收治的120例肺腺癌患者为研究对象。纳入标准：经胸腔积液细胞学蜡块病理组织学确诊肺腺癌；肿瘤细胞含量>30%；肿瘤细胞数>100个。排除标准：合并其他恶性肿瘤者；胸腔积液细胞学标本质量欠佳无法确诊。本研究经医院伦理委员会批准。所有患者均签署知情同意书。

1.2 研究方法 收集所有患者的胸腔积液50～100 ml，静置20～30 min，将底部沉淀以2 500 r/min离心10 min。倾倒上清液后，加入少许血浆和凝血酶，快速搅拌后形成凝块放入包埋盒。经10%中性甲醛固定，脱水固定，石蜡包埋后切片，切片厚度均为3 μm，每个标本各切2张，包括PD-L1检测及阴性对照各1张，同时选择胎盘切片作为阳性对照。IHC检测PD-L1一抗采用Roche公司SP263，检测仪器采用BenchMark Gx全自动免疫组化仪；PD-L蛋白在肿瘤细胞表达结果评估采用肿瘤比例评分(tumor proportion scores,TPS)法，计算阳性细胞占肿瘤细胞总数百分比[5]。扩增阻碍突变系统(the amplification refractory mutation system，ARMS)技术检测胸腔积液沉渣包埋样本的EGFR基因突变情况。

1.3 统计学方法 采用SPSS 20.0统计学软件对数据进行处理。计数资料用例(百分率)表示,组间比较采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PD-L1表达水平 120例患者中，胸腔积液检测PD-L1阳性表达70例，阳性率为58.33%(70/120)。肿瘤细胞PD-Ll表达阳性比例1%～49%、比例≥50%分别为40例、30例。

2.2 胸腔积液PD-L1表达与临床病理特征相关性分析 肺腺癌患者胸腔积液标本PD-L1阳性率与年龄、性别、淋巴结(lymph nodes，LN)转移情况、远处转移情况及治疗情况无相关性(P>0.05)。见表1。

2.3 胸腔积液PD-L1表达与EGFR基因突变相关性分析 120例患者中，采用ARMS技术检测EGFR基因突变42例(35.00%)。PD-L1阳性、阴性患者中EGFR基因突变率分别为37.14%(26/70)、32.00%(16/50)，差异无统计学意义(P<0.05)。PD-L1表达与EGFR基因突变无相关性(P>0.05)。

表1 胸腔积液PD-L1表达与临床病理特征相关性/例(百分率/%)

3 讨论

有报道显示，肺癌患者细胞学标本与组织学标本IHC检测PD-Ll表达阳性率分别为40%与27%[6-7]。一项针对肺腺癌患者的研究证实，细胞学标本与组织学标本检测PD-L1表达阳性率接近(65%比55%)[8]。有研究显示，同一肺癌患者病灶不同组织学标本，PD-L1检测水平差异较大，说明肺癌患者同一病灶内存在肿瘤异质性[9-10]。有学者认为，IHC检测细胞学标本较组织学标本PD-L1表达阳性率更高，可能与原发灶/转移灶差异有关[11]。胸腔积液标本主要来自肺癌晚期患者，多存在广泛转移，而组织学标本多来源于原发病灶。相关报道提示，细胞学标本PD-Ll表达阳性率较组织学标本更高[12]。此外，关于标本获取时间间隔、治疗手段等是否影响PD-L1表达仍无定论[13]。

本研究结果显示，PD-L1阳性、阴性患者中EGFR基因突变率分别为37.14%(26/70)、32.00%(16/50)，差异无统计学意义(P<0.05)。这一结果表明，胸腔积液的PD-L1表达可能不受EGFR基因突变的影响。有研究显示，EGFR突变患者PD-L1表达比例和总人群无明显差异，同时，PD-L1的表达与临床特征均无相关性[14-16]。由于PD-L1蛋白表达检测平台、抗体及结果判读、评价方法、检测体系等尚未统一，PD-L1检测结果缺乏广泛的一致性评估标准，临床应用中存在差异[17]。明确不同突变类型患者的PD-L1表达情况具有重要临床意义[18-19]。本研究结果还显示，肺腺癌患者胸腔积液标本PD-L1阳性率与年龄、性别、LN转移、远处转移及治疗情况均无相关性(P>0.05)。这一结果表明，胸腔积液PD-L1蛋白表达可能不受临床病理特征的影响，临床工作中，对于这部分患者需要更多的参考指标协助，以明确免疫治疗的疗效及评估预后。

综上所述，在无法获取原发肿瘤标本情况下，肺腺癌患者胸腔积液标本检测PD-L1表达具有重要的临床应用价值，且PD-L1检测结果不受临床病理特征及基因突变的影响。本研究样本量较少，且为单中心回顾性研究，无法完全排除混杂因素影响，仍有待后续前瞻性研究进一步探讨。