应用自研载体的玻璃化冷冻与慢速程序化冷冻保存羊卵巢组织的效果比较

崔妍婷，杨璐恺，刘 金，韩亦龙，陈 超，邓晓惠，蒋利刚

山东大学齐鲁医院不孕不育诊疗中心，济南 250012

近年来女性癌症发病年龄趋于年轻化，许多患者在确诊时仍有生育要求[1]，然而癌症治疗会造成不同程度的卵巢组织损伤，甚至卵巢衰竭。卵巢组织冷冻作为生育力保存方法之一，具有其独特优势。目前已有130余名婴儿通过此技术诞生[2]。卵巢组织冷冻方法主要有两种，相较于出现较早的慢速程序化冷冻，玻璃化冷冻因其操作简单、省时、经济等特点成为研究热点。玻璃化冷冻能够迅速通过冷冻敏感区，最大程度减少冰晶形成对细胞的机械性损伤和冻融效应[3]。快速降温是玻璃化冷冻减少组织损伤的关键，封闭式冷冻载体管壁较厚，影响降温速率，冷冻保存效果不理想[4]。本研究采用自研载体进行玻璃化冷冻，以探讨自研载体在羊卵巢冷冻中的效果。

材料和方法

实验动物及分组于山东省济南市小寨屠宰场选取8～10月、体重约30 kg的未孕母羊16只，共获取32只羊卵巢。获取的卵巢组织置于杜氏磷酸盐缓冲液(Dulbecco’s phosphate-buffered saline，DPBS)中，4 ℃条件下，2 h内送达实验室。去除髓质保留卵巢皮质厚约1 mm，切成8 mm×4 mm×1 mm大小的组织块，磷酸盐缓冲液反复清洗3次，整个处理过程于冰板上进行。共获取卵巢皮质64块，通过简单随机抽样方式分为新鲜组、程序化冷冻组、自研载体I玻璃化冷冻组及自研载体Ⅱ玻璃化冷冻组，每组各16块皮质，其中8块用于体外培养，另外8块用于制作石蜡切片。

主要试剂及材料二甲……