siRNA-YAP1对TGF-β2诱导的人晶状体上皮细胞上皮-间质转化的抑制作用

郑柳 胡超 杨彬彬 杨兴刚 丁芝祥

桂林医学院附属医院眼科 541001 胡超现在芜湖市眼科医院 241000

后发性白内障即晶状体后囊膜混浊(posterior capsule opacification，PCO)，是白内障术后的主要并发症之一。白内障术后残留的晶状体上皮细胞(lens epithelial cells，LECs)发生增生、迁移、上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)及细胞外基质的合成等一系列病理变化，引起正常光滑的后囊膜皱缩形成PCO，导致视力下降[1]。EMT是上皮样细胞向肌成纤维细胞转变的异常分化过程，是PCO发生的关键[2]。转化生长因子-β2(transforming growth factor-β2，TGF-β2)是诱发纤维化形成的生长因子。TGF-β2通过激活经典Smad信号传导通路、PI3K/Akt通路和其他通路调节LECs的移行、增生和EMT过程，影响PCO的发生[3-5]，10 ng/ml TGF-β2诱导HLEB-3细胞发生EMT是研究PCO的适当模型[1,6-7]。Hippo信号通路在机体发育和疾病中发挥重要作用，参与胚胎眼形成的多个阶段，其调节紊乱可能导致病理组织过度生长和肿瘤的进展[8-9]。Yes相关蛋白(Yes-associated protein，YAP)是一种转录共激活因子，通过激活靶转录因子(如TEAD家族)，促进细胞增生，抑制细胞凋亡，诱导基因表达、致癌转化和EMT，从而在调控器官大小和组织稳态中发挥重要作用[10]。通过条件性敲除发育小鼠YAP基因的研究证明，Hippo/YAP信号通路参与维持LECs和晶状体纤维的形态[11]。目前RNA干扰技术在PCO防治中已被广泛应用[12]，采取YAP基因沉默的方法是否可以阻断人LECs的EMT过程尚未完全阐明。本研究探讨小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)-YAP1对TGF-β2诱导人LECs EMT的抑制作用，为PCO的预防提供新的思路。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1细胞来源 永生化人LECs(HLEB-3细胞)购于中国科学院上海细胞库。

1.1.2主要试剂及仪器 南美胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)(美国Gemini公司)；DMEM低糖细胞培养液、质量分数0.25%胰蛋白酶(美国Gibco公司)；……