miR-142-3p抑制甲状腺癌细胞增殖的研究

余明军，王海明

(杭州市第三人民医院 外科，浙江 杭州 310009)

甲状腺癌是常见的内分泌恶性肿瘤[1]，近年来发病率持续增长，为女性肿瘤发病率第1位，男性肿瘤发病率第2位[2]。大部分甲状腺癌在手术切除结合碘131及甲状腺素治疗后可达到临床治愈，但仍存在5%的5年复发率[3]。MicroRNA(miRNA)是一类长约21～25个核苷酸的小分子非编码RNA，在癌症的发生发展中扮演着重要角色。研究表明，miR-142-3p在宫颈癌、肾癌、急性白血病、非小细胞肺癌、结肠癌、肝细胞癌、鼻咽癌、骨肉瘤、食管癌、胰腺癌及乳腺癌等恶性肿瘤中均存在异常表达[4-8]，并且miR-142-3p可直接靶向细胞周期蛋白CDC25C，促癌基因HMGB1、TGFβR1，及多种干细胞表面特异分子如CD133、Lgr5、ABCG2，调控肿瘤细胞增殖、侵袭、周期、凋亡等。Jahanbani等[9]证实miR-142-3p在甲状腺癌组织中低表达。本研究检测甲状腺癌细胞及正常甲状腺细胞中miR-142-3p 的表达水平，研究miR-142-3p 对甲状腺癌细胞增殖能力、单克隆形成能力及细胞周期的影响，以期为甲状腺癌早期诊断、预测复发及寻找新治疗靶点提供思路。

1 材料与方法

1.1 主要材料与试剂 Real-time PCR 试剂盒购自上海欣百诺生物工程有限公司，RPMI1640 培养基、DMEM 培养基和胎牛血清购自美国Gibco公司，miR-142-3p mimics、miR-142-3p inhibitor、NC mimics购自上海吉玛制药技术有限公司，脂质体LipofectamineTM2000 购自美国Invitrogen 公司，MTT溶液、DMSO溶液、流式周期检测试剂盒购自美国Sigma公司，兔抗人Anti-Cyclin D1购自美国AbCam 公司，鼠抗人β-actin购自美国Epitomics公司，其他试剂均为国产分析纯。

1.2 细胞培养 人甲状腺癌细胞K1、TPC-1、BCPAP和人甲状腺细胞Nthy-ori 3-1均购自中科院上海细胞库。K1细胞在含100 U/mL青霉素、100 μg/mL链霉素、10% FBS的DMEM培养基中培养，TPC-1、BCPAP和Nthy-ori 3-1细胞在含100 U/mL青霉素、100 μg/mL链霉素、10% FBS的RPMI1640培养基中培养，于37℃、5% CO2、饱和湿度细胞培养箱中培养。……