补肾调肝方对卵巢储备功能下降大鼠卵巢/海马功能及PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响

刘柳青 刘雁峰 潘雪 许梦白 吴豆豆 杨绿

卵巢储备功能下降(diminished ovarian reserve，DOR)是指卵巢内存留的、可募集的卵泡数量减少和(或)卵母细胞质量下降，可引起流产率升高[1]和辅助生殖妊娠不良结局[2]。近年来，精神心理因素在DOR发病中的作用逐渐受到重视。研究证实，社会心理因素会引起慢性心理应激、造成DOR[3-5]，而DOR患者亦常伴有焦虑、抑郁等情绪[6]。从中医角度看，本病以肾虚为基本病机，与肝、脾、肾等脏腑密切相关，肾虚肝郁是DOR的重要病机和常见证型[4,7]。

本团队通过前期临床观察发现，采取补肾调肝方治疗DOR可取得较好疗效，在改善DOR患者卵巢功能、伴随症状及生存质量等方面效果显著[8]，但其作用靶点及起效机制尚不清楚。因此，本研究立足DOR患者生殖能力下降与慢性心理应激状态并存的临床特征，建立DOR合并慢性心理应激大鼠模型，基于磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K),蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/AKT)，哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamyclin,mTOR)的PI3K/AKT/mTOR信号通路，从卵巢储备和神经内分泌两个角度，探讨补肾调肝方改善卵巢、海马功能的作用靶点和可能机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物及实验环境

SPF级大鼠60只，雌性，7周龄，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供[SCXK(京)2016-0006]。适应性喂养7天后，每日常规查看阴道涂片以观察大鼠的动情周期。将49只具备连续两个正常动情周期(4～5天)的大鼠纳入正式实验。

1.2 伦理审查

实验方案经北京中医药大学动物伦理委员会批准，伦理审批号：BUCM-4-2019022803-1033。

1.3 实验药物

雷公藤多苷片，10 mg/片，湖南千金协力药业有限公司，批号：20190603。……