miR-605对非小细胞肺癌细胞放射敏感性的影响*

周东亚，张海兵，耿晓如，章杭，胡阳阳，周雷*，王小龙，张璇

(1.南京中医药大学沭阳附属医院 肿瘤科, 江苏 南京 223600; 2.锦州医科大学附属第一医院 肿瘤科, 辽宁 锦州 121000)

近年，肺癌的发病率和死亡率都升高，并成为了中国乃至世界范围死亡率最高的恶性肿瘤[1]。非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer，NSCLC)的发病率在肺癌中超过80%[2]。除了外科手术外，放射疗法也是肺癌最重要的治疗方法之一[3-5]，但长时间的放射会使癌症细胞产生辐射抗性，致使放疗效果减弱[6-7]。因此，寻找一定的靶点以提高NSCLC癌细胞的放射敏感性，提高放疗效果有重要意义。MicroRNA(miRNA)是长度为19～25个核苷酸的单链RNA，可与靶基因信使RNA(mRNA)序列的3′-非翻译区(3′-untranslated region ,UTR)互补结合，并在转录后调节靶基因的表达[8]。证据表明，miRNA在包括NSCLC在内的癌症中有重要作用[9-10]，并且相关研究也指出miRNA可能成为NSCLC治疗中的生物标志物[6, 11]。据报道，miR-605对肺腺癌有特异性，能通过抑制肺癌细胞系中的MDM2来增强p53的反式激活，从而抑制肺癌细胞的增殖[12-13]，推测micro-605的表达变化是调控小细胞肺癌细胞放射敏感性的上游调控因子，但miR-605与NSCLC细胞放射敏感性的关系还未见报道。本研究以NSCLC细胞A549为对象探索下调miR-605靶向调控肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(tumor necrosis factor alpha-induced protein 3,TNFAIP3)，以提高非小细胞肺癌细胞放射敏感性的机制。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

人肺腺癌细胞A549(中科院上海生命科学研究所)，miR-605minic和miR-605 inhibitor(广州锐博生物技术有限公司)，qTR-PCR试剂盒(美国TaqMan公司)，细胞克隆法试剂盒(美国Sigma公司)，凋亡试剂盒(美国BD公司)，一抗、二抗(美国CST公司)，萤光素酶报告基因试剂盒(美国Promega公司)，流式细胞仪(美国Beckman Coulter公司)，6MV X线直线加速器(德国西门子公司)，酶标仪(美国Gibco公司)。……