miR-301a对三阴性乳腺癌细胞侵袭与增殖的调控作用*

刘恒 王钢乐 李秀楠

(首都医科大学附属北京妇产医院乳腺科，北京 100006)

三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer, TNBC)是乳腺癌的重要临床亚型之一，是一类侵袭性、恶性程度高且复发转移率较乳腺癌其他亚型更高的恶性肿瘤，其预后较非TNBC差[1]。目前TNBC首选的治疗措施仍然是手术+化疗，但患者的总体预后仍然不容乐观，积极探索TNBC发生发展的分子机制，寻求有效的抗TNBC细胞增殖的治疗措施对改善预后尤为重要。研究发现，miR-301a可作为癌基因参与结直肠癌、肝癌、胃癌、胰腺癌等恶行生物学行为。FANG等[2]提出miR-301a通过靶向SOCS6促进结直肠癌细胞的侵袭和增殖；He等[3]提出miR-301a对肝细胞癌具有潜在诊断价值。miR-301a表达上调可通过靶向RUNX3促进胃癌细胞的迁徙和增殖[4]，miR-301a过表达可增强胰腺导管癌的侵袭、迁移及成瘤能力[5]。本研究通过观察miR-301a对TNBC细胞侵袭、增殖能力的影响，以探讨miR-301a的作用机制，为TNBC的个体化治疗提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 主要材料与试剂 人正常乳腺上皮细胞MCF-10A与TNBC细胞系MDA-MB-231(中科院上海生命科学研究院细胞资源中心)。用100 U/mL青霉素、100 U/mL链霉素、10%胎牛血清(FBS)(美国GIBCO公司)的DMEM培养基(美国GIBCO公司)于5% CO2、37.5 ℃培养箱中培养。lipofectamine 3000购自美国Invitrogen公司， miRNA qPCR 试 剂 盒购自北京艾德莱生物科技有限公司，miR-301a模拟物、miRNA 逆转录试剂盒、miR-301a抑制物及其阴性对照均购自北京全式金生物技术有限公司，Transwell 小室试剂盒购自Corning公司；MTT试剂盒购自北京富龙康泰生物技术有限公司；RIPA 裂解液购自美国GIBCO公司。

1.2 实验方法

1.2.1 细胞转染 首先将MDA-MB-231细胞均匀接种于6孔板中，密度1.2×105个/孔，培养至细胞融合度为 70%～80%。……