miR-144t通过对肝细胞生长因子的调控抑制肝癌细胞MHCC97H的增殖、迁移及延缓肝癌进展

樊赟 樊纪民 卞华

(1南阳理工学院 河南省张仲景方药与免疫调节重点实验室，河南 南阳 473000;2河南省南阳市卧龙区中医药管理局)

肝细胞癌(HCC)是原发性肝癌(PLC)的病理类型之一，占比达90%以上，肝癌发病率居世界癌症发病率第五位，致死率居第二位〔1〕，我国肝细胞癌发病率占世界总数的55%〔2〕，且发病率逐年增加。近年，肿瘤分子靶向治疗成为肝癌治疗的热点，临床上细胞分子靶向治疗对于肝癌，尤其是晚期阶段发挥重要作用〔3〕。肝细胞生长因子(HGF)由肝脏间叶细胞分泌，可调控多种组织及细胞增殖分化，如启动肝再生、促细胞分裂、运动、抗凋亡等〔4〕。HGF主要通过与c-met形成二聚体，激活磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)等通路，发挥其生物学功能〔5〕。miRNA是一种单链非编码小分子RNA，它可调控人类基因组中约三分之一基因的表达，研究表明，近一半已知miRNAs与肿瘤相关，发挥致癌或抑癌作用〔6〕。本研通过分析miR-144对靶基因HGF调控作用，为诊断及治疗肝癌提供新的研究方向。

1 材料与方法

1.1组织样本采集 收集2016年12月至2018年5月就诊于南阳理工学院附属医院病理科确诊为肝癌的患者69例，其中男51例，女18例，平均年龄(55.29±8.41)岁。采集肝癌组织及匹配癌旁组织，肝癌组织均由病理学医师共同诊断，且取样前未行放化疗。

1.2方法

1.2.1标本采集 清晨空腹采集肝癌患者外周静脉血3 ml，1 000 r/min离心10 min，采集血清，-80℃保存待测。

1.2.2qRT-PCR检测miR-144表达量 取0.5 ml血清标本，采用Trizol法提取血清总RNA，进行RNA逆转录，合成cDNA，进行PCR反应。实验步骤均按照试剂盒中说明书进行。

1.2.3细胞培养和转染 肝癌细胞SMCC7721、MHCC97H、LM3和HepG2及人肝上皮细胞THLE-3均购自上海中科院细胞库。……