人肺腺癌细胞A549低温保存优化研究

杜羽琨,周新丽

（上海理工大学 医疗器械与食品学院，上海 200093）

人肺腺癌细胞A549既有肺泡上皮细胞的形态及特性，又表现出典型的肺腺癌恶性特征，广泛用于体外肺癌发病基因筛查、药物筛选等临床研究[1-2]，因此，临床研究工作对高质量肺癌细胞样本有较大的需求。低温保存是样本库长期储存大量肺癌细胞的常用方法，可以在需要时提供大量高质量样本用于临床基础研究，以及其他医学研究，例如，扩增生物样品、培养细胞微团、建立人源肿瘤异种移植模型（patient-derived tumor xenograft,PDX）或培养类器官。目前，样本库中大多数细胞样本采用传统慢速冷冻方法进行低温保存，具体方法是采用10%（体积分数） me2SO作为低温保护剂，将装有细胞悬液以及保护剂的冻存管放入程序降温盒中，再将程序降温盒放入−80℃冰箱中，24 h后转移至液氮中保存。然而，使用这种方法，复苏后细胞回收率还不够高，细胞活力相对新鲜细胞较差，且不同的细胞所适宜的冷冻方法和条件有较大差异[3-6]，所以，有必要针对样本库中人肺腺癌细胞A549，研究其适宜的低温保存方式以及低温保护剂。

传统的慢速冷冻降温过程中，低温保护剂会出现过冷的现象，溶液结晶释放潜热使样品温度迅速回升，导致样品温度与冷源温度的温差较大，使溶液结冰速率过快，细胞没有足够长的脱水时间，形成胞内冰损伤，不利于细胞低温保存。“置核”是目前最有希望解决过冷问题的方法之一，通过人为的操作，在溶液内部形成小范围低温区，以此引发晶核的形成，消除溶液过冷。……