七种肿瘤相关自身抗体联合检测对肺癌的诊断价值

贺侠琴 王伟琦 邓 凯 张凯歌

西安交通大学第一附属医院检验科，陕西西安 710061

肺癌是目前最常见的恶性肿瘤之一，也是全球癌症相关死亡的主要原因[1-2]。肺癌的5年平均生存率为17.4%，随着癌症的发展，生存率会随之下降[3]。虽然ⅠA期肺癌的10年生存率为92%，但约85%的肺癌患者在晚期被确诊，失去手术的机会，因此早期发现肺癌对提高总体生存率意义重大[3]。血清肿瘤标志物虽然对肺癌有一定的诊断价值，但主要用于疗效监测，对诊断价值较低[4-5]。肿瘤相关抗原的过表达、突变、折叠等可激活机体的免疫系统而产生相应自身抗体，称为肿瘤相关自身抗体（tumor associated autoantibody，TAAB），且 这 种TAAB可在外周血液中持续较长时间，且在肺癌无症状期电子计算机断层扫描（CT）筛查呈阳性5年前即可被检测出[6]。近年来发现多项TAAB联合检测为肺癌的诊断和预后提供新的参考方法[7-8]。本研究旨在探讨7-TAAB（CAGE、GAGE7、GBU4-5、MAGE A1、PGP9.5、SOX2、p53）单独及联合检测在肺癌中的诊断价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选 择2018年5月 至2020年2月 在 西 安 交通大学第一附属医院（我院）胸外科收治的肺癌组患者148例，其中男91例，女57例，平均年龄（61.2±8.2）岁，肺癌组均经本院病理科组织病学检查确诊，其中肺鳞癌44例、肺腺癌85例、小细胞肺癌19例。根据TNM分期标准，Ⅰ期50例，Ⅱ期13例，Ⅲ期27例，Ⅳ期39例。肺癌诊断标准依据中华医学会肺癌临床诊疗指南（2018版）[9]。纳入标准：①患者初诊，未经手术治疗及放化疗；②经活检等组织病理学确诊为肺癌；③无其他恶性肿瘤且临床资料完整。排除标准：对放化疗或手术治疗，或同时患严重的感染性疾病、重要脏器疾病，临床分期未明确者予以排除。同时收集同期本院健康对照组152例，其中男108例，女44例，平均年龄（57.1±6.3）岁；肺部良性疾病组患者35例，其中男20例，女15例，平均年龄（60.2±11.3）岁。三组患者性别、年龄等一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。本研究获本院医学伦理委员会讨论批准后实施，所有受试者均征得知情同意。

1.2 方法

采集肺癌组、肺部良性疾病组和健康对照组空腹静脉血4 ml，2500 r/min离心10 min，分离出血清，8 h内完成检测，采用酶联免疫吸附试验（enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）试剂盒（杭州凯保罗生物技术有限公司）对标本进行检测，并使用美国伯乐iMark酶标仪在450 nm处读取吸光度，严格按照试剂说明书进行操作。7-TAAB试剂盒的cut-off值分别为为：CAGE 7.2 U/ml，GAGE7 14.4 U/ml，GBU4-5 7.0 U/ml，MAGE A1 11.9 U/ml，PGP9.5 111 U/ml，SOX2 10.3 U/ml，p53 13.1 U/ml。

1.3 统计学处理

应用SPSS 22.0软件处理数据，7-TAAB水平Kolmgorov-Smirnov（K-S）检测呈偏态分布，用中位数（四分位间距）表示，多组间比较采用非参数Kruskal-Wallis H秩和检验，两组间比较采用Mann-Whitney U检验，通过ROC曲线综合评价7-TAAB单项及联合检测对肺癌的诊断价值，确定合适的临界值，血清7-TAAB联合检测采用并联试验（血清7-TAAB任一指标高于cut-off值则确定为阳性，全部抗体水平阴性则为阴性），P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组7-TAAB比较

肺癌组7-TAAB（CAGE、GAGE7、GBU4-5、MAGE A1、PGP9.5、SOX2、p53）水平与健康对照组和肺部良性疾病组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。两组间比较，肺癌组血清7-TAAB水平明显高于健康对照组，差异有统计学意义（P均＜0.05），肺癌组与肺部良性疾病组比较，CAGE、GAGE7、MAGE A1、PGP9.5、SOX2、p53水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05），GBU4-5比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 三组7-TAAB水平比较[M（P25，P75）,U/ml]

2.2 7-TAAB单项及联合检测对肺癌的诊断价值分析

以健康对照组和肺部良性疾病组作为对照组，肺癌组为疾病组，绘制ROC曲线，7-TAAB联合检测诊断肺癌的ROC-AUC（0.766）和敏感度（82.4%）明显高于单项检测的结果。见表2、图1。

表2 7-TAAB单项与联合检测对肺癌的诊断价值评价

图1 7-TAAB单项及联合检测预测肺癌的ROC曲线

2.3 7-TAAB联合检测对不同组织分型肺癌的诊断价值

以健康对照组和肺部良性疾病组作为对照组，分别以鳞癌、腺癌和小细胞肺癌为疾病组绘制ROC曲线，血清7-TAAB联合检测对小细胞肺癌和鳞癌的ROC-AUC和敏感度高于腺癌。见表3。

表3 7-TAAB联合检测对不同组织分型肺癌的诊断价值

2.4 肺癌组患者不同临床特征的7-TAAB联合检测的阳性率比较

肺癌组患者7-TAAB联合检测在不同年龄、不同组织分型和不同临床分期的阳性率比较，差异无统计学差异（P＞0.05），而在不同性别间的阳性率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表4。

表4 肺癌组患者不同临床特征的阳性率比较

2.5 7-TAAB联合检测在各组间的阳性率比较

7-TAAB联合检测在肺癌组的阳性率[82.4%（122/148）]明显高于健康对照组[39.4%（60/152）]，差异有统计学意义（χ2=57.993，P＜0.05），与肺部良性疾病组[68.5 %（24/35）]比较，差异无统计学意义（χ2=3.370，P＞0.05），肺部良性疾病组阳性率与健康对照组比较，差异有统计学意义（χ2=9.375，P＜0.05）。

3 讨论

在肿瘤转移之前诊断肺癌并给予早期治疗，可以显著提高患者生存率。血清中经典肿瘤标志物诊断肺癌的敏感度较低，特异度较差，无法满足临床诊断需求[10]。CT可检出体积较小的肿瘤，然而CT筛查的假阳性率较高，不能鉴别良恶性肿瘤，亟需寻求一种简便的生物标志物来作为肺癌的诊断工具，降低误诊率[11]。在肿瘤发病早期，肿瘤相关抗原由于基因突变、蛋白异常等原因引起机体产生自身免疫应答，刺激B细胞分泌TAAB，少量的肿瘤相关抗原通过体液免疫的信号放大作用产生大量的TAAB[11]，且TAAB在临床症状出现前数年即可以被检测出，因此检测TAAB可为肺癌早期诊断开辟一条新途径。

p53是一种肿瘤抑制因子，激活DNA修复途径，抑制肿瘤细胞的增殖，在临床诊断肺癌之前即可出现。PGP9.5是泛酸水解酶，是非小细胞肺癌的生物标志物[12]。SOX2是一种转录因子，在肺癌、乳腺癌等多种恶性肿瘤组织中表达，并且癌细胞向远处转移的能力与其过表达呈正比[13]。MAGE-A1、GAGE7、CAGE、GBU4-5均属于肿瘤-睾丸抗原，在多种恶性肿瘤中表达，肺癌患者体内水平较高，不表达于人体正常组织[12]。本研究结果显示，肺癌组7-TAAB水平明显高于健康对照组，除GBU4-5外，其他6个TAAB水平与肺部良性疾病组比较差异无统计学意义，这与赵娟等[14]的研究结果略有差异，此研究结果表明，肺癌组7-TAAB水平明显高于肺部良性疾病组，本研究并未得出此结论，可能原因与本研究选取的肺部良性疾病组病例数较少有关。本研究通过ROC曲线综合评价7-TAAB单独及联合检测对全肺癌的诊断价值，结果显示7-TAAB单项检测诊断肺癌的敏感度较低，联合7-TAAB诊断肺癌的ROC-AUC（0.776）和敏感度（82.4%）明显高于单项检测的结果，与Huang 等[15]的研究结果一致，提示低敏感度限制了单个TAAB在临床中的应用，联合7-TAAB可显著提高诊断肺癌敏感度。本研究进一步分析了7-TAAB联合检测分别对鳞癌、腺癌和小细胞肺癌的诊断价值，结果显示，血清7-TAAB联合检测对小细胞肺癌的敏感度最高，对于非小细胞肺癌，鳞癌的敏感度高于腺癌，与Huang 等[15]的研究结论相似。将肺癌患者按不同临床特征进行分组，血清7-TAAB水平在不同年龄、不同组织分型、不同临床分期间阳性率无显著统计学差异，提示血清7-TAAB可以检测早期及晚期肺癌，这种现象可能与免疫放大机制有关，在肿瘤发生早期通过体液免疫反应信号放大作用，可以检测到TAAB，表明联合7-TAAB检测对于早晚期肺癌诊断均有一定的临床应用价值。本研究还得出血清7-TAAB联合检测在肺癌组的阳性率（82.4%）和肺部良性疾病组的阳性率（68.5%）明显高于健康对照组（39.4%），但是肺癌组与肺部良性疾病组间阳性率比较差异无统计学意义，提示血清7-TAAB联合检测可以区分肺癌患者与健康人，但是对肺部良恶性结节无鉴别诊断价值，与蔡学琴等[16]研究结果不一致，本研究良性疾病组数量较少，可能会得出错误的统计结论，这可能也是与其他研究结果不一致的原因，后续将进一步扩大研究范围及增大样本量探讨血清7-TAAB在肺良恶性疾病及肺癌预后的临床应用价值。