微量法测定土壤酶活性的实验步骤

葛永翠

（兰州中大司法鉴定所，甘肃 兰州 730030）

1.微量法测定土壤β-葡萄糖苷酶活性

1.1 实验的意义

土壤β-葡萄糖苷酶（S-β-GC）能够催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的糖苷键生成葡萄糖，是纤维素分解酶系中重要的组成成分之一，在土壤微生物的糖类代谢方面具有重要的生理功能。

1.2 实验原理

S-β-GC能够催化对-硝基苯-β-D吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有特征光吸收。

1.3 实验所要的耗材

烘箱、研钵、白纸、自封袋、30-50目筛子、万分之一电子天平、称量纸、药匙、离心管、离心管板、移液器10ul100ul200ul、移液枪头10ul200ul、96孔板、振荡器、离心机、水浴锅、酶标仪：S-β-GC试剂盒、蒸馏水、甲苯

1.4 实验步骤

土样的前处理，将新鲜的土样放在37°烘箱中烘干待用；用研钵研磨并过30～50目筛子，仔细收集过筛的土样即为风干的土样，装进自封袋并用记号笔编上编号，方便做样和处理数据；

称取0.02g风干土样分别于1.5ml的离心管中，一个是对照管，一个是测定管，并作三平行；

给对照管和测定管各加入10ul的甲苯，震荡混匀15分钟，加入试剂盒里面的试剂三各160ul,其中测定管在加入试剂盒里面的试剂二130ul，对照管加入130ul的蒸馏水是体系达到平衡，反应总体积都是300ul；

37°控温振荡器里面催化反应一小时，一定迅速拿出来，结束催化反应，使得到的数据更佳准确；

将离心管放入90°水浴锅中煮沸5min，注意放入前一定压紧离心管的盖子，以免沸水浴的时候会崩开盖子，使其水分蒸发，影响实验结果，最好把水浴锅的盖子不要盖紧，留一个开口，盖子崩开的几率就会变小；……