天麻、法半夏水提物对ox-LDL 诱导HUVECs 损伤的影响

梁伟海 陈志宁 林国伟 刘晓俊

痴复康方是中医脑病学专家刘茂才教授总结的治疗卒中后认知障碍的代表方，被制成广东省中医院院内制剂长期用于临床，前期研究表明痴复康方能改善患者脑卒中后前瞻性记忆障碍[1]。痴复康方主要由天麻、法半夏、黄芪、人参、制何首乌等组成，其中天麻平肝熄风，法半夏燥湿化痰，二者配伍共奏熄风化痰之功。血管内皮细胞的功能影响血管再生和神经元再生，从而对脑缺血后神经保护发挥重要作用。本实验通过对痴复康方拆方，选取方中药对天麻、法半夏，研究其对氧化型低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein，ox-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）损伤的影响，探讨痴复康方作用机制。

1 材 料

1.1 药材天麻、法半夏（广州市药材公司中药饮片厂，批号YPA8C0001、YPA8G0002）。

1.2 试剂 ox-LDL（广州奕元生物技术公司，批号YB-002），DMEM 培养基（美国HyClone 公司，批号SH30809.01B），胎牛血清（美国Gibco 公司，批号1027-106），胰蛋白酶（武汉博士德生物公司，批号PYG14190），胰酶消化溶液（美国Biosharp 公司，批号WH0518），磷酸盐缓冲液（上海碧云天生物技术公司，批号C0221A），Annexin V-APC/7AAD 细胞凋亡检测试剂盒（杭州联科生物公司，批号4224750），碘化丙啶（上海碧云天生物技术公司，批号ST512），核糖核酸酶A（美国Sigma 公司，批号R4875），血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）抗体（美国Proteintech 公司，批号19003），血管内皮生长因子受体-2（Vascular endothelial growth factor receptor-2，VEGFR-2）抗体（美国Abcam 公司，批号5473），高纯总RNA 快速提取试剂盒（美国Bioteke 公司，批号RP1201），预混液形式的两步法RT-qPCR 首选试剂（美国Vazyme 公司，批号R223-01），RT-qPCR 扩增预混合溶液（上海翊圣生物公司，批号11202ES08），（100-2000bp）-DNA 分子量标准[美国Takara 公司，批号3427B（Ax2）]。

1.3 仪器 净化工作台（苏州净化有限公……