干扰长链非编码RNA NEAT1上调miR-126抑制胃癌细胞的生长、间质转换及裸鼠肿瘤形成*

陶正贵 杜静虎 田 葵 王东华 胡凤琪 陈 钰

(1. 湖北文理学院附属医院，襄阳市中心医院普外科，襄阳 441000)(2. 襄阳市中心医院肾内科，襄阳 441000)

核富集的转录物1(nuclear paraspeckle assembly transcript 1，NEAT1)是近年来研究新发现的一个长链非编码RNA，作为细胞核内paraspeckles的重要组成，主要用于维持细胞核内mRNA的稳定、调节基因的表达[1]。临床研究发现，NEAT1在肿瘤的发生发展过程中，都存在异常高表达现象，并且与肿瘤的转移、分期、预后等密切相关[2-3]。miRNA是广泛存在真核生物中具有保守性的一类特异性的核苷酸[4]，可参与细胞的多种生物学行为，如细胞的增殖、分化、凋亡等[5-7]。miR126是一种高表达于内皮细胞、浆细胞样树突状细胞中的短链核苷酸[8]，研究显示其在肿瘤细胞中表达水平显著降低；恢复肿瘤细胞miR126的表达水平后，肿瘤增殖明显受到抑制[9]。目前，关于长链非编码RNA NEAT1与miR-126的靶向关系及对肿瘤的生物学行为研究尚无报道。因此，本研究主要探讨长链非编码RNA NEAT1与miR-126的靶向关系及对胃癌细胞的生物学行为影响，并通过构建移植瘤裸鼠模型，分析NEAT1对肿瘤生长的影响。

1 材料与方法

1.1 主要试剂和仪器

胃癌细胞MGC-803、SGC-7901和人胃上皮细胞购自ATCC；SPF级BALB/c雌性裸鼠20只，4～6周龄，体质量17～20 g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，实验动物生产许可证号：SCXK(京)2017-0022。DMEM培养液及胰蛋白酶(上海生工生物工程有限公司)；胎牛血清(Gibco)；LipofecamineTM2000 TRIzol反转录试剂盒(Thermo Fisher)；SYBR PCR Master Mix试剂盒(TOYOBO)；Ki67、Caspase-3、N-cadherin、E-cadherin、β-actin、蛋白抑制剂等(Santa Cruz)；HRP羊抗兔IgG、HRP羊抗鼠IgG(Thermo)；Ki67、Caspase-3成套免疫组化试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)；NEAT1阴性对照病毒、NEAT1干扰shRNA(上海吉玛制药技术有限公司)；……