miR-223-3p通过调控ECT2诱导非小细胞肺癌细胞凋亡的实验研究

王熙凯，孟庆贺，高燕鲁

(1．首都医科大学基础医学院，北京 100069；2．北京大学公共卫生学院，北京 100191；3．山东中医药大学第二附属医院，山东 济南 250001)

作为全球最常见的癌症，肺癌的发病率占癌症总发病率的11.4%，而其死亡率占癌症总死亡率的18.0%，2020年全球大约有22.1万例新增肺癌患者、18.0万例因肺癌而死亡的患者。肺癌包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)，其中NSCLC是肺癌最常见的类型，约占85%，肺腺癌是NSCLC中最常见的类型。靶向疗法在肺癌的治疗中有广泛应用，但目的靶标的检出率较低导致后续治疗患者预后较差。因此，寻找合适的靶标是肺癌靶向疗法的主要研究方向。近年研究发现微小核糖核苷酸(micro ribonucleic acid，miRNA)可以与靶基因的3"端非翻译区特异性结合从而在转录后水平调控基因表达。有研究报道miR-223-3p与上皮细胞转化序列2基因(epithelial cell transforming sequence 2，ECT2)参与调控癌细胞的增殖过程，并且与细胞凋亡有关。但非小细胞肺癌中miR-223-3p与ECT2对癌细胞的增殖及凋亡的影响尚不明确，因此，本研究选取非小细胞肺癌患者癌组织和癌旁组织检测miR-223-3p与ECT2的表达水平，初步探讨两者的相关性，并采用过表达miR-223-3p和沉默ECT2处理A549细胞，进一步探讨miR-223-3p对非小细胞肺癌细胞增殖与凋亡的影响及可能作用机制。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

RPMI-1640培养液和胎牛血清，购于Gibco公司；Lipofectamine 2000购于赛默飞公司；噻唑蓝[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5 diphenyltetrazolium bromide，MTT]、二甲基亚砜、0.25%胰酶(不含EDTA)、Annexin V-FITC、 propidium iodide(PI)、 radioimmunoprecipitation assay(RIPA)裂解液、phenylmethanesulfonyl fluoride(PMSF)、蛋白上样缓冲液、牛血清白蛋白购于碧云天公司；磷酸盐缓冲溶液(phosphate buffered solution，PBS)、3,3-二氨基联苯胺 (super sensitive polymer-HRP ISH detection system，DAB)溶液购于中杉金桥公司；快速瑞氏-姬姆萨复合染色液(A液+B液)购于南京建成公司；……