基于蛋白质组学分析侧脑室微量注射GnIH对下丘脑蛋白的调节作用

王凤霞，司丽娜，魏萌，杨松鹤，程露阳，乔跃兵

承德医学院，河北承德 067000

下丘脑作为调控生殖和能量代谢的高级中枢，其分泌的促性腺激素释放激素（GnRH）被认为是调节脊椎动物生殖的惟一下丘脑神经肽［1］。2000年，TSUTSUI团队发现了一种可以抑制GnRH释放的新型下丘脑神经肽——促性腺激素抑制激素（GnIH）。GnIH可通过其G蛋白偶联受体GPR147作用于GnRH神经元，抑制促性腺激素合成和释放［2］。本课题组前期实验［3-4］表明，GnIH对GnRH、卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、Kisspeptin神经元和阿片—促黑素细胞皮质素原（POMC）起负向调节作用，对神经肽Y（NPY）起促进作用。可见GnIH是调节整个脊椎动物繁殖和神经内分泌系统不可或缺的要素［5］。但GnIH是否会对下丘脑的其他蛋白发挥调节作用有待进一步研究。本研究对卵巢摘除术补充雌激素（OEP）大鼠侧脑室微量注射GnIH，运用液相色谱—串联质谱（LC-MS/MS）和生物信息学分析探讨GnIH对下丘脑蛋白质的影响。另外，经CPTAC数据库检索关键蛋白在激素相关性肿瘤中的表达情况，通过蛋白印迹检测关键蛋白的表达，为探究GnIH与激素依赖性肿瘤的相关性提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 30只成年SD大鼠，雌性，SPF级，体质量200～250 g，购自北京华阜康实验动物中心（合格证号：11401300016009），饲养于实验动物中心。室温维持在25℃左右，通风良好。SD大鼠循环光照12 h、自由饮水、摄食。本实验所涉及的动物和实验符合实验动物伦理管理委员会的要求。

1.1.2 细胞 将人乳腺癌细胞系MCF-7置于含有10%胎牛血清和1%青链霉素的DMEM培养基中，并置于37℃、5%CO2、饱和湿度的恒温培养箱中培养24 h，每2～3 d换液1次，待细胞长满培养皿的80%～90%按1∶2～1∶3进行传代，取对数生长期细胞进行相关实验。……