GPR30受体拮抗对大豆异黄酮降低ox-LDL诱导的EA.hy926细胞氧化损伤的影响

郭金洲 陈海宁 马晶鑫 田维毅 蔡 琨

贵州中医药大学,贵州 贵阳 550000

现代医学认为动脉粥样硬化(Atherosclerosis，AS)是多因素共同作用引起的疾病，虽然其发病机制尚不明确。但研究发现，氧化应激是AS发生发展的重要因素[1]，而ROS蓄积增多引起的血管内皮氧化损伤是 AS发病机制的关键环节[2-3]。

G蛋白偶联雌激素受体(G protein-coupled estrogen receptor,GPER/GPR30)作为一种新型的7次跨膜G蛋白偶联雌激素膜受体[4]，在雌激素非基因组效应中发挥主要作用[5]。有报道称，通过调节GPR30降低动脉粥样硬化的发生[6]。以往的研究发现，大豆异黄酮(soy isoflavones,SIF)具有良好的抗氧化损伤作用[7-8]，SIF是植物雌激素的一种，具有类雌激素作用。因此我们推测大豆异黄酮可能通过GPR30介导的类雌激素效应降低内皮细胞氧化损伤。为验证我们的猜想，实验选用ox-LDL诱导EA.hy926细胞构建内皮氧化损伤模型，使用SIF干预损伤模型，观察其抗氧化作用，并观察使用GPR30受体拮抗剂G-15干预后，SIF抗氧化损伤效应的变化，进而探讨SIF抗氧化损伤及其与GPR30的关系。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞株 人脐静脉内皮细胞融合细胞(Human umbilical vein cell fusion cell，EA.hy926),购自中国科学院昆明细胞库(编号：KCB2014049YJ)。

1.1.2 试剂与仪器 大豆异黄酮标准品购自上海源叶生物有限公司； ox-LDL购自广州奕源有限公司；RIPA裂解液购自索莱宝科技有限公司；CCK-8试剂购自尚宝生物科技有限公司；ET-1Elisa试剂盒购自深圳子科；LDH检测试剂盒、MDA检测试剂盒、SOD检测试剂盒均购自南京建成有限公司；SDS-PAGE凝胶制备试剂盒购自BIO-RAD公司；RNA提取试剂盒购自Thermo公司；PrimeScriptTM RTreagent Kit with gDNA Eraser、TB GreenTM Premix Ex TaqTM Ⅱ(Tli RNaseH PLUS)购自Takara公司；β-actin antibody、山羊抗兔荧光Ⅱ抗购自Absin公司；GPR30 antibody购自购自CST公司。……