胶质母细胞瘤长链非编码RNA表达谱分析

朱镇宇，黄 翔，孙俊龙，施金龙

（1南通大学医学院，江苏226001；2南通大学附属医院神经外科）

胶质瘤是最常见的原发脑肿瘤[1]，占成人中枢神经系统原发性恶性肿瘤的75%[2]。在世界卫生组织（WHO）2016年更新版中枢神经系统肿瘤分类中，胶质母细胞瘤（glioblastoma，GBM）属于Ⅳ级胶质瘤，恶性程度最高，预后不良。传统手术及放疗对GBM患者生存期改善的效果不佳，因此探索胶质瘤发生发展的分子机制对寻找新的诊疗方法具有重要意义。长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）长度大于200个核苷酸[3-4]，越来越多的研究报道LncRNAs异常表达可能参与胶质瘤的发病过程，包括细胞增殖、凋亡和转移[5-7]。LncRNAs异常表达可作为胶质瘤早期诊断的生物标志物，并可作为治疗靶点[8-9]。本研究通过高通量测序获取GBM的lncRNAs表达谱，对差异表达的lncRNAs进行基因本体（GO）富集化分析和通路富集化分析，以期探索GBM新的诊疗方法。

1 材料与方法

1.1 患者与样本招募 6例脑外伤患者和6例经组织病理学检查确诊的GBM患者，脑外伤患者中男性3例，女性3例，年龄35～64岁，GBM患者中男性3例，女性3例，年龄43～72岁。手术切取脑外伤患者正常脑组织和GBM患者肿瘤组织，于60 min内转移至-80℃保存。两组患者均无其他严重疾病，GBM患者未接受过化疗或放疗。本实验经南通大学伦理委员会批准，所有患者签署知情同意书。

1.2 RNA文库构建及RNA测序 使用Trizol试剂（Invitgen，Cat No.15596-026，USA）从脑组织样本中提取总RNA，使用Ribo-Zero rRNA去除试剂盒（Illumina，USA）从总RNA样品中去除rRNA，然后利用TruSeq Stranded Total RNA Library Prep Kit（Illumina，USA）构建RNA文库。对文库进行质量控制，应用BioAnalyzer 2100系统（Agilent Technologies，USA）进行量化。将10-pM文库变性为单链DNA分子，在Illumina Flow细胞上捕获，原位扩增成簇，扩增150个循环，并在Illumina HiSeq Sequencer上进行测序。……