AKT/mTOR信号通路介导神经病理性疼痛对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

李玉为，张巧云，曹亚红，王家友，李 锐

心肌缺血是缺血性心脏病患者发病和死亡的主要原因之一，往往需要溶栓或经皮冠状动脉介入治疗，冠状动脉缺血一段时间后再灌注会进一步加重心肌损伤。缺血预处理可以有效减轻心肌缺血再灌注损伤，研究表明伤害性刺激也可以产生类似的保护效应。神经病理性疼痛是躯体感觉神经系统损伤或疾病引起的疼痛，但其对心肌缺血再灌注损伤是否有保护作用尚有争议。心肌缺血再灌注损伤后自噬增强，与蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路有关。自噬细胞通过自身细胞器与溶酶体融合后降解，供新功能物质合成，对细胞存活有利，但过度自噬会加重心肌缺血再灌注损伤。该研究拟观察神经病理性疼痛对大鼠心肌缺血再灌注的影响，并从细胞自噬的角度初步探讨其机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物与分组

42只雄性成年SD大鼠，体质量250～320 g(10周龄)，由安徽医科大学实验动物中心提供。采用随机数字表法分为为三组(

n

=14)：对照组(Con组)、心肌缺血再灌注损伤组(I/R组)和神经病理性痛+心肌缺血再灌注损伤组(NP+I/R组)。动物饲养环境温度控制为(22±1)℃，湿度控制为(40±15)%，昼夜节律按12 h/12 h进行周期性调节饲养。

1.2 主要试剂和仪器

2,2-联喹啉-4,4-二甲酸二钠(BCA) 蛋白定量试剂盒购自上海碧云天科技研究所；HE染色试剂盒购自南京建成生物研究所；AKT、p-AKT、p-mTOR、mTOR均购自美国Cell Signaling Technology公司；微管相关蛋白1轻链3(microtube-associated protein 1 light chain 3，LC3)、β-actin均购自美国Abcam公司；山羊抗兔和山羊抗鼠二抗均购自北京中杉金桥生物科技有限公司；……