miR-223在甲型流感病毒诱导的肺上皮细胞炎症中的作用机制

刘翠翠，尚立群，段进进，陈瑞琳，张永庆，杨淑梅

NOD样受体蛋白(NOD-like receptor protein，NLRP)家族是NLR的重要成员，其中NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体是由NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD，ASC)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1前体(pro-cysteine-aspartic acid protease 1，Pro-Caspase-1)组装成的多蛋白复合体，可将Pro-Caspase-1剪切为有活性的Caspase-1，进而剪切白细胞介素前体(pro-interleukin，Pro-IL)包括Pro-IL-1β、Pro-IL-18和Pro-IL-33形成有活性的成熟IL-1β、IL-18和IL-33，分泌至细胞外，介导炎症反应和诱导免疫病理损伤。

微小RNA(microRNA，miRNA)是一类长度约为20～24个核苷酸的内源小RNA，其介导的转录后调控在基因表达的控制中发挥重要作用。研究表明，微小RNA-223(microRNA-233，miR-223)能够特异性作用于

NLRP

3 mRNA的3′-UTR区，从而抑制NLRP3的翻译表达。在病毒入侵时，为了避免引起免疫反应，机体会释放miRNA抑制NLRP3炎症小体的激活。目前，关于miR-223在流感病毒引起的肺部损伤中作用的研究报道较少。该研究旨在探究miR-223对流感病毒引起的肺部损伤的作用及其机制，为临床上流感的治疗提供新的理论依据。

1 材料与方法

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1 材料

收集甲型流感患者32例和正常受试者32例的血清样本，所有患者均知情同意，且本研究已获国家科研伦理委员会批准。正常人肺上皮细胞(bronchial epithelial cells, BEAS-2B)购自中国科学院细胞库，以及甲型流感病毒(influenza A virus, IAV，A/Puerto Rico/8/34/H1N1)(于9～11 d的可育SPF鸡蛋的尿囊内繁殖)。RPMI 1640培养基、胎牛血清购自美国HyClone公司；TRIzol、反转录试剂盒和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)试剂盒购自美国Promega公司；BCA蛋白质定量检测试剂盒购自美国Thermo Fisher Scientific公司；兔抗鼠NLRP3、兔抗鼠Bax、兔抗鼠Caspase-3、兔抗鼠Bcl-2和鼠抗GAPDH购自美国Abcam公司；转染试剂Lipofectamine3000购自美国Invitrogen公司；PCR引物、miR-223 mimic以及阴性对照NC mimic由北京擎科生物科技有限公司设计、合成。……