PI3K/AKT通路与TRPC6通道在Ang Ⅱ诱导足细胞损伤中的相互作用

王先鹤,吴 慢,邓 芳，2,高 慧

众所周知，足细胞是肾小球滤过膜的重要组成部分，其结构的损伤和功能的改变都会影响肾小球滤过膜的通透性。肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system, RAS)在维持肾脏生理功能及肾脏疾病的发生、发展过程中发挥着重要作用，血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ，Ang Ⅱ)是RAS的主要效应分子，在足细胞损伤以及蛋白尿的发生过程中发挥主要作用。足细胞表达的瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(transient receptor potential cation channel protein 6, TRPC6)是一种非选择性阳离子通道，属于足细胞裂孔膜蛋白的一种。磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B, PI3K/AKT)信号通路是足细胞肌动蛋白细胞骨架动力学的重要调节剂，该信号通路的激活，是维持足细胞功能完整性的重要组成部分。该研究旨在进一步探讨PI3K/AKT信号通路与TRPC6通道在Ang Ⅱ诱导的肾小球足细胞损伤中的相互作用，为肾小球疾病的诊治和用药新靶点的研究提供新的思路及依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

小鼠足细胞MPC5细胞株购自北京北纳创联生物技术研究院；DMEM低糖培养基购自美国HyClone公司；胎牛血清(FBS)购自以色列BI公司；Ang Ⅱ购自美国Sigma公司；氯沙坦(货号：ab120997)、PI3K/AKT通路抑制剂(货号：LY294002)、TRPC6通道阻滞剂(货号：SKF96365)、兔抗磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B，p-AKT)抗体购自英国Abcam公司；兔抗AKT、TRPC6抗体购自美国CST公司；兔抗β-actin单克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG购自武汉三鹰生物技术有限公司；增强化学发光(ECL)试剂盒购自上海Tanon公司；反转录试剂盒、实时荧光定量PCR 试剂盒购自日本 Takara公司；实时荧光PCR引物购自生工生物工程(上海)股份有限公司)；Hoechst 33258染色试剂盒购自上海贝博生物科技有限公司。……