miR-138-5p靶向TCF4调节眼葡萄膜黑色素瘤细胞的恶性生物学行为

魏 丽，连红梅，刘 鹏，刘兴华，吴书一，刘萌萌

眼葡萄膜黑色素瘤是成人常见的一种眼内原发性恶性肿瘤，起源于葡萄膜黑色素细胞，其具有易于增殖和转移的特点。在各种原发性眼部肿瘤中，葡萄膜黑色素瘤发病率居于第二位，仅次于视网膜母细胞瘤。据报道，葡萄膜黑色素瘤预后较差，常发生肝转移。葡萄膜黑色素瘤的发病机制目前尚不清楚，因此进一步探讨其发病机制、提高对其诊疗水平具有现实意义。

microRNA是一种长度大约在220 bp的非编码单链小RNA，其通过与靶信使RNA的3′非翻译区结合，在转录后水平上调控基因表达。microRNA在多种肿瘤的侵袭转移及凋亡等生物过程中都发挥着重要的作用。有研究表明，miR-138在不同癌症中异常表达，其通过靶向许多与增殖、凋亡、侵袭和迁移相关的靶基因，起到抑癌作用。然而，miR-138-5p在眼葡萄膜黑色素瘤MuM-2B细胞中的调控机制少有报道。该研究重点探讨miR-138-5p影响MuM-2B细胞的恶性生物学行为的作用机制。

1 材料与方法

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1 主要试剂和仪器

MuM-2B细胞系购自武汉普诺赛生命科技有限公司；miR-138-5p mimic (序列：5′-GCCGGACUAAGUGUUGUGGUCGA-3′)、mimic-NC (序列：5′-GCCGGACUAAGUGUUCACCAGCU-3′)、转录因子4(transcription factor 4,TCF4)过表达重组质粒(pcDNA-TCF4)及其对照载体(pcDNA)购自广州RiboBio公司；Lipofectamine® 2000、Superscript RNase H-逆转录酶购自美国Invitrogen公司；RNA purification system购自德国Qiagen公司；DNase-I购自瑞士Roche公司；随机六聚体购自美国Sigma-Aldrich公司；含TCF4野生型/突变型的荧光素酶报告基因质粒载体由上海Genepharm公司合成；双荧光素酶报告基因检测试剂盒购自美国Promega公司；Giemsa染色液、1%结晶紫、10% SDS-PAGE、羊抗兔IgG-HRP、ECL化学发光检测试剂盒购自北京索莱宝公司；10%胎牛血清购自美国Gibco公司；……