华蟾素干预下化疗药物对BRAFV600E基因突变型甲状腺乳头状癌细胞的生物学影响

曹新春 郭伟胜

BRAFV600E基因突变型甲状腺乳头状癌（Papillary thyroid cancer，PTC）在所有PTC病例中占40%～80%[1]，具有较高的复发率和较低的生存率，预后较差[2，3]。目前国内外公认PTC的主要治疗方式为甲状腺部分或完全切除术，其次通过用放射性131I治疗消除残余甲状腺癌组织，术后终身服用甲状腺激素替代治疗，可以使大部分患者的5年生存率提高到97.8%[4]，但同时要面临手术并发症较多的风险。中药华蟾素是从中华大蟾蜍蟾酥中分离出的天然药物，具有清热解毒、消肿、止痛、提高机体免疫力等功能。目前华蟾素在临床上主要应用于肝癌、肺癌、食管癌等肿瘤的综合治疗中，但BRAFV600E基因突变的高风险PTC的相关中医药治疗研究中较少。本研究从华蟾素对BRAFV600E基因突变型PTC增殖、迁移、侵袭的影响及其分子机制展开研究，以期揭示华蟾素在BRAFV600E基因突变型PTC的发生发展中的作用机制，为PTC的治疗提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂细胞培养箱（美国Thermo公司）；流式细胞仪（美国BD Biosciences公司）；NanoDrop 2000（美国Thermo公司）；华蟾素注射液（安徽金蟾生化股份有限公司）；DNase I、RNase A、Trizol（Invitrogen公司）；DMEM培养基（美国Invitrogen公司）；胎牛血清（美国Hyclone公司）；二甲基亚砜（DMSO）、胰蛋白酶（德国Sigma公司）；CCK-8细胞检测试剂盒、Fast-FusionTMClonase（广州复能基因有限公司）。

1.2 实验方法

1.2.1 细胞复苏及培养 所用细胞为BRAFV600E基因突变型人PTC细胞B-CPAP，使用添加10%胎牛血清+1%双抗的RPMI-1640于37℃、相对湿度95%、5% CO2恒温培养条件下进行常规培养。将细胞进行传代使细胞的融合度达到80%～90%，根据细胞的密度决定传代的数量。

1.2.2 CCK-8细胞活力检测 将制备好的细胞悬液接种到96孔板中，培养2h后加药处理。……