基于数字化环介导等温扩增技术的牛乳中大肠杆菌快速精准定量分析

易昌毓,罗自生,潘响亮,林星宇*

1(浙江工业大学 环境学院,浙江 杭州,310014) 2(浙江大学 生物系统工程与食品科学学院,浙江 杭州,310058)

在生产过程中极易被微生物污染从而导致牛乳变质,因此微生物超标在牛乳生产过程中是一个重要的卫生安全问题[1]。大肠杆菌是乳品国家标准中规定菌群检测项目的主要目标物,同时也是食品中粪源性污染卫生细菌学指标[2]。常见的大肠杆菌检测方法主要有平板计数法和分子生物学方法[3]。平板计数法是依据GB 4789.3—2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数》[4]对乳品中大肠杆菌进行检测,该方法操作简单但会漏检活的非可培养状态菌[5]。同时,过长的检测时间会导致检测结果无法及时指导生产[6]。分子生物学方法中的聚合酶链式反应法(polymerase chain reaction,PCR)[7]及实时荧光PCR法(quantitative real-time PCR,qPCR)[8]可以缩短检测时间并测定少量核酸,但无法进行绝对定量分析[9]。同时需要安装大体积的仪器,无法用于食品现场快速检测[10]。牛乳中大肠杆菌的有效控制,要求其得到快速准确的检测,因此,迫切需要建立一种大肠杆菌快速检测新方法以满足市场需求。

环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是由日本科学家NOTOMI等[11]率先建立的新型核酸扩增方法,该方法具有特异性强等特点[12],且在微生物检测领域具有广泛的应用前景[13]。LAMP反应产物的检测可以通过肉眼观察法观察白色焦磷酸镁沉淀[14]以及采用电泳法观察梯形条带[15],但肉眼观察法易受观察者主观影响,电泳法操作繁琐且会造成假阳性污染[16]。……