早期自然流产患者绒毛组织染色体异常分析*

陈 妍，禹东慧，宁 艳，王双魁，田 英

(南方医科大学附属深圳妇幼保健院中医科，广东 深圳 518028)

早期自然流产是指12周前自然状态非人为的妊娠终止，其发病率为15%～18%[1]，是孕产妇所面临的巨大挑战。多项研究表明，遗传因素是导致自然流产的主要原因[2]。随着辅助生育技术的发展，体外受精-胚胎移植(IVF-ET)是否增加妊娠早期流产的相关报道较少见。本研究采多重连接依赖探针扩增(MLPA)、低深度全基因组测序(CNV-seq)技术对IVF-ET术后患者及自然妊娠患者流产组织进行绒毛染色体异常分析，寻找其流产相关遗传因素，为临床提供理论依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 回顾性分析2018年9月至2019年10月本院自然流产患者310例，其中IVF-ET助孕患者107例，自然妊娠患者203例。纳入标准：(1)诊断为胚胎停育；(2)年龄小于或等于45岁，孕周小于或等于12周。排除标准：外伤、感染、发热等因素所致流产。所有患者均签署知情同意书。

1.2方法 收集患者一般资料，包括年龄、流产次数、孕周、受孕方式等。选取流产绒毛组织20～50 mg，用0.9%氯化钠液清洗3～5次，采用MLPA、CNV-seq技术检测绒毛组织DNA。

1.3统计学处理 采用SPSS17.0统计软件对数据进行分析。计数资料以率或百分比表示，组间比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1绒毛组织染色体异常情况 310例自然流产患者中，绒毛组织染色体异常214例(69.03%)，其中数目异常200例(64.52%)，结构异常14例(4.52%)。绒毛组织染色体异常分布具体情况见表1。214例染色体非整倍性异常中，16号染色体异常发生频率最高，其次是22号染色体、X染色体。见图1。107例IVF-ET助孕患者中，染色体异常发生频率为61.68%(66/107)，其中22号染色体异常占比最高[22.73%(15/66)],其次为16号染色体[16.67%(11/66)]。203例自然妊娠患者中,染色体异常发生频率为72.91%(148/203)，其中16号染色体异常占比最高[23.65%(35/148)]，其次为22号染色体[11.49%(17/148)]。1例患者绒毛检测结果显示，20p13～20p11.23存在18.45 Mb重复，22q11.1～22q13存在26.8 Mb重复。

图1 绒毛组织染色体异常发生频率

表1 绒毛组织染色体异常分布情况(n=310)

2.2不同年龄段患者绒毛组织染色体异常情况 随着年龄增加，绒毛组织染色体异常发生率随之增加(P<0.05)。见表2。

表2 不同年龄段患者绒毛组织染色体异常情况

2.3不同自然流产次数患者绒毛组织染色体异常情况 随着流产次数增加，绒毛组织染色体异常发生率随之下降(P<0.05)。见表3。

表3 不同自然流产次数患者绒毛组织染色体异常情况

2.4不同受孕方式患者绒毛组织染色体异常情况 自然妊娠流产患者绒毛染色体异常发生率高于IVF-ET助孕患者，差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 不同受孕方式患者绒毛组织染色体异常情况

3 讨 论

自然流产病因复杂，包括遗传因素、免疫失衡、内分泌异常、血栓前状态、子宫结构异常、生殖道感染、不良环境和心理等[2]，其中遗传因素占主要比例[3]。约半数的早期自然流产由染色体异常引起[4]，多数是染色体数目异常，少数为结构异常[5]。绒毛组织染色体检测有助于了解早期自然流产病因，为患者再生育提供优生、优育科学指导。

本研究结果显示，310例自然流产患者中，绒毛组织染色体异常214例(69.03%)，稍高于其他文献[6-8]。考虑与样本年龄相关。产前诊断中的80%～90%染色体数目异常常发生于13、18、21号染色体及性染色体[9]。本研究结果显示，16号染色体异常发生频率最高，其次是22号染色体、X染色体、15号染色体、21号染色体，其中包括胎儿有可能存活至孕中期甚至出生的染色体(X、21号染色体三体)，以及胎儿常规无法活产的染色体(16、22、15号染色体三体)[10]。1、5、19号染色体异常在本研究中均只检测出1次，可能是这几例罕见的染色体核型数目异常胚胎在着床时期已流产，甚至于无法着床。

本研究结果显示，随着年龄增加，绒毛组织染色体异常发生率随之增加，与其他文献一致[11]。随着流产次数的增加，胎儿染色体异常检出率呈下降趋势[12]。本研究结果显示，随着流产次数增加，绒毛组织染色体异常发生率随之下降，与其他文献报道一致[13]。每次妊娠胚胎都是独立个体，如果反复检测绒毛染色体均出现复杂嵌合、微缺失等结构变化，需警惕父母双方是否存在平衡易位等自身染色体异常。本研究结果显示，自然妊娠流产患者绒毛染色体异常发生率高于IVF-ET助孕患者，与其他文献报道不一致[14]。考虑IVF-ET助孕患者因本身存在不孕因素，如内分泌、免疫异常或生殖器器质性病变等，均可能会增加流产风险。因此，IVF-ET术后胚胎停育患者染色体异常发生率较自然妊娠者少。目前尚未明确促排卵治疗、体外培养等对胚胎染色体是否存在的潜在风险[15]，需进一步大样本研究。

本研究中，1例患者(已生育1个正常女婴，自然流产3次，既往2次均未查绒毛染色体)流产(即第3次流产)绒毛检测结果显示，20p13～20p11.23存在18.45 Mb重复，22q11.1～22q13存在26.8 Mb重复。提示20号染色体断臂存在18.45 Mb重复，该片段重复与20p部分三体综合征有关[16]；22号染色体长臂存在27.8 Mb重复，该片段重复与22q部分三体综合征有关[17]。追查夫妻双方及孩子的染色体发现，男方及女儿染色体核型未见异常，女方染色体核型为46，XX，t(20；22)(p11.2q13)。提示平衡易位携带(20、22号染色体)。遗传咨询贯穿于整个流产过程中[18]，检出染色体异常后，建议进行遗传咨询指导再次妊娠。对于绒毛染色体结构异常患者，有必要追踪夫妻双方染色体，并指导备孕。

综上所述，胚胎染色体异常是导致流产的主要因素，与年龄、既往自然流产次数、受孕方式有一定相关性。对于反复因胚胎因素导致流产患者，建议行植入前遗传学筛查。