实验性先天性巨结肠症大鼠结肠神经节细胞中PHOX2B的免疫组织化学表达特征

李霁伟，谢余澄，武红芳，阿智祥，高燕，周军

（昆明市儿童医院病理学科，昆明 650228）

先天性巨结肠症（Hirschsprung’s disease,HD）是小儿常见的肠道疾病，新生儿中发病率约为1/4000～1/5000，居先天性消化道畸形第二位。HD主要病理改变是远端的狭窄肠管内肌间神经丛（Auerbach丛）和粘膜下神经丛（Meissner丛）内神经节细胞缺如，神经纤维增粗[1]。HD的发病机制尚不十分清楚，一般认为是胚胎发育过程中肠神经嵴细胞迁移障碍或迁移后不能正常生长分化所致[2]。为了发现更特异的诊断HD的方法，本研究应用免疫组织化学方法比较了同源异型盒蛋白2B（pairedlike homebox 2B，PHOX2B）、calretinin和S-100在HD肠壁的表达特征。

材料与方法

1 动物

40只SPF级SD大鼠，2月龄，体重（220±10）g，雌雄各半，购自于昆明医科大学动物实验室，并委托饲养至性成熟后繁殖幼鼠。取4至5日龄80只，雌雄不限，随机分为模型组和空白对照组2组，每组40只：模型组采用0.5% BAC处理乙状结肠；空白对照组采用5ml 0.9%生理盐水处理乙状结肠。

2 试剂

实验中的主要试剂见表1。

表1 实验试剂Tab. 1 Experimental reagents

3 HD乳鼠动物模型建立

于1978年有学者利用BAC成功建立大鼠无神经节细胞症模型[3]，之后该动物模型和实验方法也广泛用于去神经方面的研究。本研究在经典的HD动物模型基础上[4-6]，根据儿童生理特点，利用乳鼠模拟建立HD动物模型，从而更贴合儿童HD病理生理状态。

新生4～5d龄SD乳鼠40只，在无菌条件下腹部正中1%利多卡因局部麻醉，麻醉处切口提出乙状结肠（距离肛门1～1.5cm处），将0.5%BAC溶液浸泡过滤纸条（1.5cm×0.5cm）紧贴肠壁环形包绕乙状结肠，每10min滴加50µl的0.5% BAC溶液于滤纸上，保持滤纸湿润，60min后移去滤纸条，清洁腹腔，还纳肠管，关闭腹腔，注射用青霉素钠粉剂涂切口，每天1次。……