灵芝孢子油制备护手霜工艺研究

丁梦祥，王俊，邓情雨，李国栋，张晴晴

（亳州学院中药学院，安徽亳州 236800）

灵芝孢子油是从灵芝发育后期弹射释放出的种子即灵芝孢子粉中提取出的脂溶性物质，其化学成分主要包括灵芝三萜类、不饱和脂肪酸、有机锗、灵芝多糖和蛋白质等。现代药理与临床实践研究表明，灵芝孢子油具有抗炎镇痛、提高机体免疫力、抗氧化、抗衰老、改善睡眠质量、抗癌抑制肿瘤以及保肝护肝等作用[1]。灵芝孢子油广泛应用于食品、医药等行业中，尤其是在保健及疾病的预防与治疗方面。现阶段研究发现，灵芝孢子油具有有改善皮肤和美容方面的作用，具有明显抗衰老、抗氧化、抗辐射等作用[2]。灵芝提取物应用于化妆品中，可以起到护肤功效，如清除自由基、增白、保湿、改善角质层、更新皮肤、延缓皮肤衰老、祛斑、抗炎、抗辐射以及抗过敏等。因此，在化妆品中添加适量的灵芝提取物逐渐成为化妆品开发的热点[4]。本实验采用超临界CO2萃取法，提取灵芝孢子粉中的灵芝孢子油，研制含有灵芝孢子油的护手霜，并对护手霜中的三萜类化合物含量进行分析,为灵芝孢子油的广泛应用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

灵芝孢子粉，安徽黄山云乐灵芝有限公司；玫瑰精油，化妆品级，广东省佛山市香菜师香薰有限公司；牡丹皮提取物（上海百雀羚日用化学有限公司第三分公司（R）），灵芝三萜对照品为齐墩果酸，中国药品生物制品检定所；橄榄油、甘油，化妆品级，上海百雀羚日用化学有限公司第三分公司；法国305 乳化剂，化妆品级，广州珠峰进出口贸易公司；实验所用水为纯化水。

HA22050-06 型超临界萃取装置，江苏南通市华安超临界萃取有限公司；UH4150 紫外可见分光光度计，日本日立；HK-2A 型超级恒温水浴，南京南大万和科技有限公司。

1.2 灵芝孢子油的提取

使用超临界CO2萃取装置在萃取压力26 MPa、萃取温度42 ℃、分离压力10 MPa、分离温度58 ℃、萃取时间90 min 条件下[5]对灵芝孢子粉进行提取，提取完毕后提取物装入烧杯。

1.3 灵芝孢子油护手霜制作方法

配方由3 种组分构成。组分1：甘油4.5 g，灵芝孢子油4.0 g，橄榄油4.0 g，玫瑰精油2 滴；组分2：纯化水75 g，牡丹皮提取物1 滴；组分3：乳化剂3 05 8.5 g。

将油相（灵芝孢子油4.0 g、橄榄油4.0 g）和8.5 g乳化剂305 于同一烧杯中，于75 ℃水浴锅中搅拌加热至混合均匀。将组分2（水相）纯化水75 g 和甘油4.5 g 混合于同一烧杯中。缓慢加入水浴锅中装有灵芝孢子油和乳化剂的烧杯，在加入过程中不断搅拌，直至烧杯中混合液体完全呈白色乳状后从水浴锅取出，加入2 滴玫瑰精油和1 滴牡丹皮提取物再次进行搅拌至室温。

1.4 灵芝孢子油三萜含量的测定

精密称取灵芝孢子油50 mg 置于100 mL 烧瓶中，加入无水乙醇约50 mL 置超声水浴中超声震荡至完全溶解，冷却至室温，移入100 mL 容量瓶中，并用无水乙醇定容至刻度，得待测液。

吸取待测液0.20 mL 于5.00 mL 比色皿中，加入新配置的5%香草醛与冰乙酸混合溶液0.20 mL 和高氯酸0.80 mL，摇匀。先置于70 ℃水浴加热15 min，取出，再置于冰水冷却5min，最后置于常温自来水中水浴调至室温。取出后向比色皿中加入1.5 mL 冰乙酸稀释，混匀。以空白试剂为参比，使用紫外可见分光光度计在546 nm 处测比色皿中已处理待测液的吸光度值。根据宋福江等[1]研究中的方法测得齐墩果酸标准曲线即可计算出灵芝孢子油总三萜含量。

1.5 灵芝孢子油化合物护手霜质量考察

根据中国QB/T1857-2004 标准，对使用灵芝孢子油制备的护手霜进行检测（3 次平行）。检测项目分别有感官指标和理化指标。色泽、香气、膏体属于感官指标；pH 值、耐热性、耐寒性及离心考核属于理化指标。

2 结果与分析

2.1 三萜类化合物的含量测定

齐墩果酸标准曲线回归方程为：y=11.033x+0.441，R2=0.923 1。对灵芝孢子粉提取物三萜类化合物吸光度值和含量进行测定并计算其平均含量，其结果见表1，平均含量为1.007 3 mg/g。

表1 三萜类化合物吸光度值及其含量测定

2.2 灵芝孢子油护手霜三萜类化合物含量

根据配方可计算得到每件护手霜所含总三萜成分为4.029 2 mg。

2.3 灵芝孢子油化合物护手霜质量考察

灵芝孢子油护手霜的质量考察结果见表2：该灵芝孢子油护手霜成品各项感官指标、理化指标均符合国家标准。

3 结论

以灵芝孢子粉为原材料，采用超临界CO2萃取法提取灵芝孢子油，并用于制备灵芝孢子油护手霜，制备所得护手霜每件含三萜类化合物4.029 2 mg。该护手霜制备的工艺简单易操作，制备的成品色泽均匀、膏体细腻，各项理化指标、感官指标均符合国家标准。

考察类别考察指标检查结果1检查结果2检查结果3色泽乳白色符合符合符合香气符合规定香型要求符合符合符合膏体细腻、均匀一致符合符合符合pH4.0～8.55.25.25.2耐热性（40±1）℃保存1 h、2 h、3 h，恢复至室温后未出现油水分离现象符合符合符合耐寒性-5～-10 ℃保存1 h、2 h、3 h，恢复至室温后未出现油水分离现象符合符合符合离心3 000 r/min 离心，未出现油水分离现象符合符合符合