二甲双胍对骨骼肌异位脂肪沉积的作用机制研究

郑 晖，全军承，程 绩，周人杰

(陆军军医大学第二附属医院急诊科，重庆 400037)

骨骼肌异位脂肪沉积是机体发生糖脂代谢紊乱、胰岛素抵抗和2型糖尿病的重要原因[1-2]。围脂滴蛋白(perilipin，PLIN)是最具代表性的脂滴包被蛋白，它直接或间接参与骨骼肌的脂质代谢，与脂滴的动态平衡、脂质代谢稳态及靶器官胰岛素敏感性关系密切[3-5]。有研究证实，PLINs的表达受腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)[6]和过氧化物酶体增殖物激活受体δ(PPARδ)信号通路的调控[7]。二甲双胍是临床上防控糖尿病的一线药物，它能激活AMPK信号通路，增强骨骼肌的胰岛素敏感性。因此，本研究旨在探讨二甲双胍是否通过AMPK-PPARδ-PLINs信号通路抑制骨骼肌异位脂肪沉积，从而改善胰岛素抵抗。

1 材料与方法

1.1 材料

8周龄C57BL/6J小鼠24只由陆军军医大学实验动物中心提供，分笼饲养在SPF级动物房，自由饮水觅食、恒温。标准饲料和60%高脂饲料购自北京华阜康生物科技有限公司。二甲双胍购自美国Sigma公司；欧姆龙血糖仪、配套血糖试纸，以及胰岛素(INS)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和游离脂肪酸(FFA)检测试剂盒购自上海酶联生物有限公司；一抗PLIN2和PLIN5购自英国Abcam公司，一抗AMPK、PPARδ、p-AMPK购自美国Cell Signaling公司；DNA提取试剂盒购自凯杰公司；PCR和逆转录试剂盒购自日本TaKaRa公司。PLIN1:上游引物TGGAAACTGAGGAGAACAAG，下游引物ATGTCACAGCCGAGATGG;PLIN2:上游引物GAAACTGAGGAGAACACATCA，下游引物TGTCACGACATCAGCCA;PLIN3:上游引物TATTGGATCCGTACAGCCCAG，下游引物TATTAAGCTTGCCCCACGAC;PLIN4:上游引物TAACCCTATTATCTCTCCCT，下游引物GGTGTTTTAGGATTGACAT;PLIN5：上游引物GGTGACATCAGCCAAGGATACAG，下游引物TCCACCAGCTTCTCCGACTT;18s RNA:上游引物CGCAAATTACCCACTCCCGAC，下游引物GTAACCTCCCGTTCAGACCAC。

1.2 方法

1.2.1实验分组

本研究经陆军军医大学第二附属医院伦理委员会审查批准实验。……