氯化锂通过JNK信号通路诱导HEI-OC1毛细胞样细胞的凋亡*

孙宇轩 唐晓敏 徐晨宇 郭小涛 赵轶 梁越 潘春晨 孙家强 孙敬武

氯化锂(lithium chloride, LiCl)在临床上常用于治疗双向情感障碍[1]。氯化锂治疗剂量和中毒剂量的安全范围小，具有明显的神经毒性、肾毒性和生殖毒性[2,3]。在人体内，严重的氯化锂中毒可引起明显的不可逆性听力损失[4]。近期有研究表明，氯化锂可以激活脑组织中c-Jun氨基末端蛋白激酶(c-Jun N-terminal kinase, JNK)的表达并促进细胞凋亡[5,6]。但有关氯化锂对内耳影响的研究目前甚少，尚不清楚氯化锂是否能通过JNK信号通路对耳蜗毛细胞造成损伤，从而造成听力损失。故本研究拟通过建立体外HEI-OC1毛细胞样细胞的氯化锂损伤模型，探讨氯化锂对HEI-OC1毛细胞样细胞的作用及可能的作用机制。

1 材料与方法

1.1细胞培养 HEI-OC1(House Ear Institute-organ of Corti 1)小鼠耳蜗毛细胞样细胞株由美国House耳科研究所提供。将细胞置于含有10%胎牛血清的DMEM高糖液体培养基(Gibco，美国)中，在33℃、含10% CO2空气的条件下采用TC处理后的六孔培养板培养，每孔细胞1×106个/mL，每2～3天换液，当细胞密度接近80%时传代。

1.2CCK-8检测氯化锂对HEI-OC1毛细胞样细胞的抑制并计算IC50值 采用CCK-8试剂盒(生工公司，中国)对细胞进行检测。HEI-OC1毛细胞样细胞制成细胞悬液，以5×104个/mL的细胞浓度接种于96孔板中，每孔含100 μL完全培养基。在33℃、含10%CO2的空气条件下培养过夜后，分组加入氯化锂，浓度分别为0、25、50、75、100、125、150 mM；继续在33℃、含10%CO2空气的条件下培养。分别在12、24、48、72小时分别加入10 μL的CCK-8试剂，孵育2小时后采用酶标仪(Thermo Fisher Scientific，美国)设定在450 nm处检测每孔的吸光度值，每个样本至少有三个重复，根据吸光度值绘制各组细胞的抑制曲线，根据拟合曲线计算出氯化锂24小时的IC50值。……