高分辨率熔解曲线法检测饮用水中两种假单胞菌

岳 苑，周梦诗，徐 娟，李 睿，何利华，赵 飞，张建中，龚 杰

假单胞菌属(Pseudomonasspp.)，专性需氧的革兰阴性无芽胞、有荚膜杆菌，呈杆状或略弯。大多数菌的适温为30℃，存在于土壤、淡水、海水中。假单胞菌属中研究最多的是铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)[1]，是伤口感染较常见的一种细菌，能引起化脓性病变。脓汁呈绿色，故又称脓杆菌。广泛分布于自然界(泥土、水、空气和植物)及正常人皮肤、肠道和呼吸道，是临床上较常见的条件致病菌之一[2]，且对消毒剂、紫外线、干燥等条件具有很强的抵抗力[3]，尤其是在免疫系统受损的患者中[4]，能够引起急性肠道炎、脑膜炎、败血症和皮肤炎症等疾病[5]。

现行国家标准 GB 19298-2014《食品安全国家标准 包装饮用水》[6]和GB 8537-2018 《食品安全国家标准 饮用天然矿泉水》[7]都对铜绿假单胞菌有限制要求，说明桶装饮用水被该菌污染后，可能危害消费者的健康[5,8-9]。近年来，铜绿假单胞菌引起的食物中毒的事件时有发生，给消费者带来了食品安全隐患[10]。

国家标准中分离铜绿假单胞菌的方法为传统的生化鉴定方法，鉴定耗时长(7 d左右)、操作步骤繁杂，而且恶臭假单胞菌的菌落形态与部分非蓝绿色铜绿假单胞菌极其相似，难以分辨。除生化鉴定方法外，还有普通PCR法[11-12]和Real-time PCR法[13-14]。普通PCR法比较费时，而Real-time PCR法探针成本较高。高分辨率熔解曲线(High Resolution Melting，HRM)是一种新型基因分型技术，原理在于DNA序列的差异使得熔解温度不同，最终形成不同形态的熔解曲线。该技术通常与实时荧光PCR相结合，能够实时监测温度上升时双链DNA的解链过程[15]。……