结核分枝杆菌Rv3621c原核表达及免疫功能研究

毛莉蓉，许礼发，王晓春，张 健

结核病(tuberculosis，TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis,M.tb)感染引发的重大呼吸道传染病，其病程长、传染性强、易迁延不愈。2018年世界卫生组织(WHO)估算全球TB新发病例数和死亡病例数约为1 000万和124万。再加上耐药性TB的急剧增加，TB的全球控制面临严重威胁。

尽管卡介苗(Bacille Calmette-Guerin,BCG)可有效预防婴幼儿TB，但其免疫保护期短、保护水平参差不齐且效价逐年下降，经10～20年后降至保护力不显著[1-2]，且WHO不推荐重复接种。因此筛选并检测M.tb基因组中具有免疫保护性潜力的特定基因，已成为TB疫苗研究策略的重要方向。多方研究发现，RD区抗原有助于维持TB感染时的免疫自稳状态，可一定程度加强BCG的免疫效力[3]。本课题构建M.tb感染分泌期表达的RD9区抗原Rv3621c并进行纯化，通过人群外周血试验和小鼠试验检测rRv3621c的特异性和免疫原性，旨在筛选可做BCG初免的增强疫苗的靶抗原。

1 材料与方法

1.1 实验动物和伦理声明 SPF级C57BL/6雌性小鼠购自北京华阜康生物科技有限公司[动物合格证号：SCXK(京)2014-0004]，6～8周龄，体重12～20 g。动物饲养与试验流程严格遵循《实验动物管理条例》，所有动物实验经安徽理工大学医学院动物伦理与试验委员会批准后进行。

1.2 菌株和主要实验材料M.tbH37Rv灭活毒株由山西长治医学院附属和平医院检验科惠赠；E.coliDH5α、BL21(DE3)株购自上海昂羽生物科技有限公司；Ni-NTA蛋白纯化系统购自德国QIAGEN公司；人IFN-γ ELISA购自深圳Dakewe公司；鼠相关细胞因子检测试剂盒购自杭州MULTI SCIENCES；单磷酰脂质A(MPLA)、人工合成海藻糖6，6′-二分枝菌酸(TDB)均购自Sigma公司；鼠源性His单抗、SYBR Green Kit试剂盒购自TIANGEN公司；……