食管癌组织中PTPN12的表达及其对Yes-2细胞恶性生物学行为的影响

牛云峰，杨 阳，王欣晨，沈素朋，郭 炜，董稚明

食管癌位居全球恶性肿瘤病死率的第6位。食管癌主要分两类：食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)和腺癌(esophageal adenocarcinoma, EAC)[1]。我国是ESCC的高发国，且地域分布上有明显差异，河北省太行山地区是食管癌的高发区。ESCC的早期症状不明显，起病较隐匿，多数患者出现症状时已是中晚期，且术后5年生存率较低，因此寻找早期诊断和预后评估的分子指标及发病机制是提高患者生存率的重要手段。非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶12(protein tyrosine phosphatase non-receptor type12, PTPN12)基因定位于染色体7q11.23，其N末端含有PTPs家族的保守磷酸酶结构，C端则为PEST序列(脯氨酸P、谷氨酸/门冬氨酸E、丝氨酸S及苏氨酸T残基)，所以也称PTP-PEST[2]。PTPN12是一种重要的肿瘤抑制因子，在细胞中普遍表达，通过多个靶标的去磷酸化调节细胞内信号传导，是细胞迁移和黏附的重要调节剂，但有关PTPN12在ESCC中的表达及生物学特性的研究较少。因此，本实验首先检测PTPN12在ESCC组织中的表达情况，分析其与临床病理特征的关系；其次检测PTPN12在ESCC细胞系中表达情况，为进一步探讨PTPN12在ESCC中的生物学作用。本实验通过构建pcDNA3.1-PTPN12过表达质粒，转染ESCC细胞，检测其对ESCC细胞体外增殖、迁移、侵袭能力的影响，从而为PTPN12抑制ESCC的发生、发展提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 主要试剂RPMI-1640培养液购自美国Gibco公司；胎牛血清购自德国PAN-Biotech公司；TRIzol购自北京索莱宝公司；反转录试剂盒、绿色体系均购自美国Promega公司；所用引物均由北京赛百盛基因公司合成；兔抗人PTPN12多克隆抗体(E-AB13541)购自中国Elabscience公司；SP法免疫组化试剂盒购自北京中杉金桥公司。……