巴氏染色后的涂片褪色行抗酸染色在结核诊断中的应用

杨 眉，陈 昱，唐 源

WHO《2017年全球结核病报告》指出：结核病仍然是全球主要的传染病杀手，中国的发病率仅次于印度和印度尼西亚。结核病菌会严重伤害机体的各个器官和组织，临床症状复杂，尤其肺外结核，病情表现为隐匿性变化或缺乏典型症状，临床易误诊和漏诊。结核诊断方法包括：临床症状、影像学检查及病原体检测、结核血清学检测、抗酸杆菌染色、结核杆菌基因检测等。病理科日常工作中诊断结核的主要方法为齐-尼(Ziehl-Neeslen)抗酸染色和结核杆菌荧光定量聚合酶链反应(qPCR)，虽然大部分患者可通过上述两种方法确诊，但本科室统计发现每年约10%的细胞学患者因取材困难、病灶小等原因导致组织较少，仅能进行单张巴氏染色涂片，无多余涂片进行抗酸染色和qPCR检测，本实验尝试用巴氏染色涂片褪色行抗酸染色，探讨该方法对诊断结核病的实用价值。

1 材料与方法

1.1 材料收集四川大学华西医院2013～2018年常规细胞学诊断中建议行抗酸染色的细针穿刺及脱落细胞学病例134例，本组收集的细胞样本巴氏涂片镜下特征为较多淋巴细胞、中性粒细胞、上皮细胞、肉芽肿性炎伴或不伴坏死。

1.2 主要试剂碱性复红无水乙醇饱和液，5%石炭酸溶液，3%硫酸木醇溶液，美蓝溶液，二甲苯，乙醇。

1.3 对照设置每次实验均设置阳性对照、空白对照、阴性对照。

1.4 方法(1)褪色：巴氏染色涂片室温下浸入二甲苯1～2 min，摘去盖玻片，洗掉封片胶。再依次入无水乙醇、95%乙醇、80%乙醇内数秒，自来水洗。入1%盐酸乙醇褪色3～5 min至涂片颜色变浅，自来水洗。……