异硫氰酸苯酯柱前衍生高效液相色谱法测定薏苡仁中17种氨基酸的含量

伍清芳,王敏,陈鸿平,陈林,胡媛,刘友平

(成都中医药大学 药学院,四川 成都,611137)

薏苡仁来源于禾本科植物薏苡(Coixlacryma-jobiL.var.ma-yuen(Roman.)Stapf)的干燥成熟种仁,属于我国常见的传统食品,也是卫计委公布的101种药食同源类中药材之一,具有利水渗湿、健脾止泻、除痹、排脓、解毒散结的功效[1],在治疗水肿、扁平疣及肝癌等疾病中均具有较好疗效[2-6],具有非常高的食用及药用价值,是各种药品、食品、保健品开发的热点对象之一。现代研究表明,薏苡仁除了含有脂肪酸、多糖、黄酮、三萜、生物碱等成分外[7],还含有多类氨基酸成分[8-9]。

氨基酸作为构成生命物质基础蛋白质的基本物质和人体中不可缺少的营养成分,可用其作为衡量薏苡仁品质的指标性成分。目前,越来越多的学者采用柱前衍生化HPLC[10-19]、液相色谱-质谱联用仪(liquid chromatograph mass spectrometer,LC-MS)[20-24]、高效液相色谱-荧光检测法(liquid chromatograph fluorescent detection,LC-FLD)[25]等方法分析鹿茸片、玉米等多种物质中的氨基酸成分,检测方法更加简便、准确和高效。本研究采用异硫氰酸苯酯(phenyl isothiocyanate,PITC)对薏苡仁氨基酸进行柱前衍生化,即在碱性条件下,氨基酸成分与PITC相结合生成具有紫外吸收的化合物,利用HPLC对其进行氨基酸组成分析和含量测定,以期为薏苡仁在食品、药品及保健品方面的开发利用提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

天冬氨酸(Asp,批号CHB170224)、L-谷氨酸(Glu,批号CHB180617)、L-天冬酰胺(Asn,批号CHB190213)、L-丝氨酸(Ser,批号CHB170221)、L-组氨酸(His,批号CHB181129)、L-精氨酸(Arg,批号CHB190120)、L-苏氨酸(Thr,批号CHB190215)、L-α-丙氨酸(Ala,批号CHB180307)、L-脯氨酸(Pro,批号CHB180904)、L-酪氨酸(Tyr,批号CHB190110)、L-缬氨酸(Val,批号CHB180313)、L-甲硫氨酸(Met,批号CHB180227)、L-胱氨酸(Cys,批号CHB180410)、L-异亮氨酸(Ile,批号CHB170921)、L-亮氨酸(Leu,批号CHB170712)、L-苯丙氨酸(Phe,批号CHB170414)、L-赖氨酸(Lys,批号CHB180111),对照品纯度均大于98%,成都克洛玛生物科技有限公司；……