非洲猪瘟病毒解旋酶D1133L基因序列分析、蛋白结构预测及亚细胞定位

侯 景，申超超，张大俊，杨 博，史喜绢，张 婷，崔卉梅，袁兴国，赵登率，陈学辉，张克山，郑海学，刘湘涛

(中国农业科学院兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学国家重点实验室 农业农村部畜禽病毒学重点开放实验室 国家口蹄疫参考实验室，兰州 730046)

1921年，非洲猪瘟(African swine fever，ASF)首次在肯尼亚报道[1]，2018年，首次传入中国，由于其高死亡率引起生猪大面积的死亡，给我国生猪养殖业和经济发展带来严峻挑战[2-3]。非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)是ASFV科的唯一成员，是线性双链DNA病毒，呈直径约为200 nm的正二十面体，其含有直径70～100 nm的DNA核心，外周是直径172～191 nm的衣壳和含类脂的囊膜，整个基因组大约含有151个开放阅读框(open reading frame，ORF)，可以编码150～200种蛋白[4-10]。

ASFV基因组编码5个解旋酶，分别被命名为D1133L、B962L、QP509L、Q706L、A859L，均属于解旋酶超家族II家族成员。ASFV的5个解旋酶中，QP509L和Q706L属于解旋酶超家族II DEXH/D-box家族中DEAD-box家族成员，通过基因序列分析间接证明D1133L为该家族成员[11]。DEAD-box家族解旋酶的最主要特征为含有D-E-A-D(天冬氨酸-谷氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)特定的氨基酸序列[12-13]，该家族Elf4A和Elf4B解旋酶发挥功能的氨基酸是谷氨酸，因谷氨酸为酸性氨基酸在R基团的碳环上含有极键[14]，因此谷氨酸在DEAD-box家族中更加稳定保守。在天然免疫领域中的DEAD-box家族解旋酶主要作用是促进双链DNA、双链RNA解螺旋，与mRNA 结合抑制转录水平进而抑制翻译，在蛋白水平上抑制宿主天然免疫应答进而促进肿瘤发生和炎症形成[12]。研究证明D1133L和B962L位于ASFV的病毒基因组中心，两者被40 kb碱基分开。D1133L和B962L类似于酵母“DEAH”前期mRNA 处理牛痘病毒ATP酶的D11L和D6R蛋白[15]。

本团队研究发现D1133L蛋白明显抑制宿主天然免疫应答(数据未发表)，已报道单独敲除D1133L、QP509L和Q706L后ASFV无法复制，说明解旋酶是ASFV的关键基因[11]。……