乌鳢水泡病毒L蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

张艳维，张永安，涂加钢

华中农业大学水产学院/农业微生物学国家重点实验室，武汉430070

弹状病毒是与人类疾病及工业、农业密切相关的一种重要病毒，其宿主范围广泛，主要包括哺乳动物、鸟类、昆虫、鱼类、爬行动物及植物等[1]，导致宿主患病或死亡，造成重大的经济损失。弹状病毒是一类不分节段的单股负链RNA病毒，具有包膜，病毒粒子长100～430 nm，直径45～100 nm[2]。目前已经分离出来的鱼类弹状病毒有十几种[3]。乌鳢水泡病毒(snakehead vesiculovirus,SHVV)是仲恺农业工程学院林蠡教授在2014年从广东顺德市的一个乌鳢养殖场中分离得到的1株弹状病毒，其基因组全长约11 kb，主要编码5种结构蛋白：核蛋白(N)、磷蛋白(P)、基质蛋白(M)、糖蛋白(G)和RNA依赖性RNA聚合酶蛋白(L)，属于弹状病毒科(Rhabdoviridae)、Perhabdovirus属。感染SHVV的鱼会出现典型的弹状病毒病症状，主要包括出血、水肿等[4]。

L蛋白是弹状病毒的一种结构蛋白，同时也是分子质量最大的弹状病毒蛋白，约240 ku，具有RNA聚合、mRNA封端和封端甲基化等功能[5-7]。据报道β微管蛋白、延伸因子1和鸟苷酸转移酶均与水泡性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)的L蛋白相互作用，并合成VSV RNA的必要因子[8-10]。DNA 拓扑异构酶1与埃博拉病毒L蛋白相互作用，是L蛋白聚合酶活性所必需的[11]。动力蛋白轻链 1作为转录因子，通过与病毒L蛋白结合促进狂犬病毒的初级转录[12]。虽然L蛋白的功能在人类或其他哺乳动物弹状病毒感染中已得到广泛研究[11-13]，但其在鱼类弹状病毒感染中的作用尚无报道。

由于SHVV是一种新的鱼类弹状病毒，目前还没有有效的防治SHVV感染的措施。……