RTCA与CCK-8法用于检测柴油废气颗粒物致支气管上皮细胞毒性的比较研究

谢文静，凌敏，梁婕，范姿，唐萌,#，卞倩,*

1. 东南大学公共卫生学院，南京 210009 2. 江苏省疾病预防控制中心，南京 210009 3. 南京医科大学公共卫生学院，南京 211166

空气污染是一个日益严重的公共卫生问题，造成在世界范围内超300万人过早死亡，这其中的死因包括肺癌、慢性阻塞性肺疾病等相关呼吸系统疾病[1-2]。柴油废气颗粒物(DEP)是空气污染物重要来源之一，由固体碳颗粒物和灰颗粒、挥发性有机化合物和硫化物组成[3]。有证据表明，DEP与呼吸系统相关疾病发生和肺功能损伤有关[4]。也有研究进一步证实，DEP暴露致细胞线粒体功能[5]及氨基酸转运体过表达[6]等。在受到DEP的外来刺激后，支气管上皮细胞(HBE)是第一道接触屏障，产生细胞毒性，引发炎症反应，甚至对细胞存活率产生影响[7]。因此，在DEP致呼吸系统相关疾病的机制研究中，细胞毒性实验是研究的基础和关键。

在检测细胞毒性的方法中，由于实验易于操作且结果易于标准化，通常将2种常规测定方法用于体外细胞毒性评估：Cell Counting Kit-8(CCK-8)法和实时无标记细胞分析系统(real-time cell analysis system, RTCA)[8]。CCK-8法是一种检测细胞存活和生长情况的经典方法，试剂内的WST-8在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的甲臜，细胞毒性越大，则颜色越浅，吸光度值越小，对于同一细胞，吸光度值和细胞数目呈线性关系，是常用的检测颗粒物致细胞毒性的传统实验方法。RTCA是一种检测细胞毒性的新技术，是一种建立在阻抗基础上的瞬时细胞电感应连续记录系统，电阻和细胞是否黏附、数量、体积大小及形态变化密切相关，通过检测电阻值进而实时动态监测细胞毒性反应[9-10]。……