罗哌卡因通过抑制STAT3的磷酸化诱导PC12细胞线粒体自噬*

曾 炼， 刘晨光， 孙晓东， 丁旭东， 桑 明， 罗辉宇

（湖北医药学院附属襄阳市第一人民医院，湖北襄阳441000）

罗哌卡因（ropivacaine）作为酰胺类局麻药的代表，被广泛应用于周围神经阻滞，椎管内麻醉以及疼痛治疗［1］。流行病学的研究发现罗哌卡因在大剂量和长时间的作用下会产生神经毒性，而目前尚无安全有效的预防及治疗措施［2-3］。罗哌卡因诱导神经毒性涉及多种机制，包括神经元钙超载，神经元凋亡以及神经元自噬［3-6］。线粒体自噬（mitochondrial autophagy，mitophagy）属于细胞自噬的特殊类型，其目的在于去除受损的线粒体。理论上，适度的线粒体自噬可以维持神经元内稳态，但当线粒体自噬过度激活时，会导致神经元线粒体功能进行性的损害，最终诱导神经元死亡［7-8］。在罗哌卡因诱导神经元损伤的过程中，已有研究证实罗哌卡因会导致神经元线粒体功能障碍［9-11］，但尚无研究报道其对于神经元线粒体自噬的作用，同时研究表明信号转导及转录激活因子3（signal transducer and activator of transcription 3，STAT3）可以通过第727 位点丝氨酸的磷酸化保护神经元线粒体功能，抑制过度的线粒体自噬［12-13］。故此，本项工作旨在探讨罗哌卡因对大鼠嗜铬细胞瘤PC12 细胞线粒体自噬及STAT3 磷酸化的作用。

材料和方法

1 实验材料

PC12 细胞购自于中科院上海细胞库；盐酸罗哌卡因（原料药，纯度：99.99%，恒瑞医药）；高糖DMEM 培养液和胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）购自Gibco；Cell Counting Kit-8（CCK-8）购自Biosharp；活性氧（reactive oxygen species，ROS）分析试剂盒和JC-1 线粒体膜电位检测试剂盒（KeyGEN BioTECH）；抗p-STAT3 及STAT3 抗体（Proteintech）；抗α-tubulin及 GAPDH 抗体（Abcam）；抗 PINK1、parkin、LC3 及P62抗体（Wanleibio）；DyLight 488绿色荧光II抗（Abcam）；HRP 标记的山羊抗兔和山羊抗鼠IgG、细胞核染料Hoechst 33258 及线粒体红色荧光探针Mito-Tracker Red CMXRos（Beyotime）。……